大鼠血漿中華法林的藥物動力學研究(一)

目錄

一 引言 1

二 材料與方法 2

（一） 試劑與儀器 2

1 藥品與試劑 2

2 實驗動物 3

3 實驗儀器 3

（二） 試驗方法 3

1 色譜分析方法 3

2 血漿樣品的處理與制備 3

3 標準曲線制備 4

4 方法回收率和精密度 4

5藥物動力學研究 4

三 結果 5

（一） 色譜圖及特異性分析 5

（二） 色譜分析條件的優化 6

（三） 標準曲線制備 7

（四） 回收率和精密度 7

（五） 血清中華法林藥物動力學參數計算 8

四 討論 9

（一）華法林HPLC檢測方法 9

（二）華法林華法林藥代動力學 10

五 結論 10

參考文獻 11

一 引言

 

   華法林是20世紀40年代上市的雙香豆素口服抗凝藥，由美國Wisconsin大學研究并合成的化合物，其化學結構為3-（a-苯基丙酮）-4-羥基香豆素。華法林是通過抑制羧基化酶發揮其抗凝作用，凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的谷氨酸需要羧基化轉變為γ-羧基谷氨酸后才能結合到磷脂表面，發揮使血液凝固的過程加快速度的作用。其作為維生素K依賴性因子，整個γ-羧基化的進程需要還原型維生素K的參加。華法林的作用就是使維生素K環氧化物還原酶的活性降低，使得還原性維生素K的不能生成。正是因為這種抗凝機理使得華法林對已經在體內生成的凝血因子并無抗凝的作用，只有等到原有的凝血因子全部經過代謝消耗完了之后，才能發揮抗凝效應。因為華法林的自身的抗凝原理的限制，所以其起效相對緩慢，僅在體內有效不可作為體外抗凝劑使用，停藥后也需要等到維生素 K 依賴性因子逐漸恢復到一定濃度后，抗凝作用才消失，所以其藥效持續時間較長。華法林的藥效要明顯優于阿司匹林，但起效時間明顯慢于肝素且不能體外使用。   

   隨著我國經濟的快速發展，人均收入顯著提高的，人們在飲食上追求更加精細且經常大魚大肉，我國有心血管疾病患者越來越多，華法林的因其療效顯著、作用時間持久同時作為口服藥服用方便、價格低廉而廣泛應用于心臟人工瓣膜置換術后的治療[1]，是我國目前抗凝治療最常用使用的口服抗凝血藥。雖然是目前最普遍的口服類型抗凝藥，但其也存在許多不足的地方[2]，如中毒劑量與有效治療劑量相接近治療窗小，而且即使是相同的劑量個體的反應完全不相同，同一個體在每個時間段所需的藥物劑量都可能不相同，所服的劑量稍微多一點過多或者少一點點，都極易出現血栓或者出血的現象[3]。最重要的是，影響華法林發揮藥效的因素很多。遺傳基因的差異、個體自身的差異、其他藥物的相互作用等都會影響藥效。不地區、不同膚色的人群對華法林的敏感性有較大的差異，目前許多國際研究機構都對華法林的基因影響因素進行研究，研究認為VKORC1及細胞色素P450酶 2C9(CYP 2C9)的基因多態性導致華法林劑量的個體差異[4-9]，并得出個體化的用藥劑量公式 。華法林個體差異在患者中更大。營養不良、腹瀉、嘔吐、手術創傷、低蛋白血癥等疾病因素[10]，使患者對華法林的敏感性增加以致華法林抗凝作用增強，而胃病或者不恰當的飲食習慣則會影響華法林的吸收或者抵消華法林的作用。許多藥物與華法林的相互作用都能引起華法林在個體體內的吸收與代謝清除的差異[10-11]，華法林作為口服藥主要通過消化道迅速吸收，幾乎完全通過肝臟代謝清除。消膽胺等藥物影響胃腸道對其的吸收、代謝清除影響藥效學；華法林作為羧基化酶的抑制劑，具有較強的抗凝作用，當然與其他一些具有抗凝作用藥物聯用時勢必會增加抗凝的強度，增加華法林的出現出血并發癥的概率，例如非甾體類抗炎藥和阿司匹林、高劑量盤尼西林。在眾多的藥物中要尤其關注阿司匹林，因為阿司匹林作用時間長且在臨床中被廣泛應用[12-13] 。因此為了預防出現不良反應，醫生在使用華法林的時候要注意藥物的配伍，要考慮到其他藥物是否會增加華法林的血藥濃度，必須十分精確的控制華法林的劑量，同時對患者使用華法林之后進行密切監測，避免并發癥出血的發生。

   目前醫生主要通過凝血酶原時間( prothrombin time,PT)和國際標準比值( international normalizedratio ,INR)[14]對華法林進行抗凝作用效果的監測，INR值是PT值經過國際敏感指數( international sensitivity index , ISI) 校正后的數值。凝血酶原時間是心臟機械瓣膜置換術后抗凝監測中應用最早的的監測方法，因其使用方便、快速得以迅速推廣成為華法林抗凝監測的基礎方法。該方法的不足也十分明顯：使用的受試劑對結果的影響很大，因此其的參考性就較差，容易出現抗凝治療失誤導致抗凝過度。INR因為消除了PT檢測中的一些不足，其數據更加合理，所以IRN得到了迅速推廣[14]。近年來, 醫生通過監測患者服用藥品的INR 值來指導和調整華法林的劑量，但由于其數值本身的存在一定的局限性、患者的個人差異較為明顯，同時患者在服用藥物后與醫生的信息交流不及時，出現出血等并發癥的情況時有出現 [15] 。

   目前國內外對心臟瓣膜置換病人的華法林應用頗感興趣[14、16]，尤其是初始劑量的合理性多有研究，但是臨床醫生對華法林的了解、掌握的程度并不夠，而且華法林鈉的使用說明書上出血并發癥的出現率為8%。因此存在醫生過于擔心患者服用華法林后導致出血，而拒絕給予患者華法林治療的現象。在患者初期使用華法林的劑量是難以把握的，也是最難監測的階段，目前華法林的抗凝監測主要是通過PT和INR，但是在服用華法林的初期PT和INR的值變化不顯著，PT和INR值真正完全反映華法林的抗凝作用要在其服用72個小時后。如果在抗凝初期過于相信INR極有可能會出現抗凝過度出血的情況[16-17]。因此研究體內的血漿中華法林的藥學動力學，探明華法林在人體內的分布代謝情況對于華法林的初始劑量的大小的探究很有價值，開發一種簡便、快速、靈敏、準確、穩定、不受干擾和足夠容易地在醫院實驗室進行的的高效液相色譜（HPLC）檢測方法，用于監測抗凝治療患者華法林血藥濃度水平，同時與PT及INR等抗凝監測指標結合[18]，有利于提高抗凝監測的準確性，減少抗凝并發癥的發生，指導臨床醫生合理調整給藥方案，使患者的血漿中華法林的濃度處于一個相對安全有效的值，將該值與INR值相結合，判斷華法林真正的抗凝強度，提高華法林的安全性，使其濃度在治療窗之內，減少不良反應以及并發癥的發生率。