大鼠血漿中華法林的藥物動力學研究(三)

圖 3.3  空白血清加樣色譜圖（10μg/mL）

圖 3.4  口灌給藥5h色譜圖

   在本研究中選定的柱子、流動相比例、流速、監測波長下，藥物華法林峰與雜質峰明顯，分離效果良好，通過比較華法林標準品樣品、空白血清樣品、空白血清添加華法林樣品、大鼠口灌給藥5h血漿的色譜圖，結果表明在華法林（峰1）相應保留時間處均無干擾峰出現，其保留時間為5.898 min。

（二） 色譜分析條件的優化

   本試驗在前期血漿建立方法過程中，根據文獻的報道，本研究曾采用混合有機試劑（二氯甲烷：正己烷=9:1）萃取藥物，實驗結果濃縮后靈敏度可以顯著提高，但實驗過程中發現華法林是以鈉鹽的形式存在的，水溶性較強，難以溶解到非極性的有機試劑中。

（三） 標準曲線制備

   在本提取方法和色譜條件下，華法林濃度和樣品的峰面積做線性回歸，華法林濃度范圍從0.01-10.0 mg/L，線性關系良好，血漿標準曲線方程為Y= 11438X + 127.41（r=0.9999）并得出斜率、截距以及相關系數。標準曲線圖如下：

圖3.5  華法林在大鼠血漿中標準曲線圖

（四） 回收率和精密度

表3.1 大鼠血漿中華法林鈉的回收率和精密度（n=5）

添加濃度（mg/L） 回收率 (%) 精密度（％）

日內       日間

血清 0.1 96.48±6.28 1.78       6.51

1.0 108.28±10.58 1.03       9.76

10.0 98.29±3.73 0.94       3.79

  在設計的提取方法和檢測條件下，華法林在血清中的絕對回收率達90%以上，日內變異系數（日內精密度）小于5%，日間變異系數（日間精密度）小于10%，說明該藥物在大鼠血清中回收率較好，精密度符合檢測標準（結果見表1）。最低檢測限為0.01mg/L，完全滿足血漿中華法林鈉的定量分析。

（五） 血清中華法林藥物動力學參數計算

將不同采樣時間點血清中華法林峰面積代入曲線方程中，所得血藥濃度，利用血漿中藥物濃度與采樣時間繪制藥物濃度——時間曲線（見圖2.3），利用3P97藥物動力學軟件（中國藥理學會數學藥理學專業委員會編制）計算大鼠口灌華法林后的藥物動力學參數（見表2）。

      

圖3.6 不同組大鼠血清中華法林血藥濃度-時間曲線圖

表3.2 大鼠血清中華法林藥物動力學參數（n=6）

參數 華法林 華法林+血栓通

劑量（mg/kg） 0.2 0.2

房室模型 有吸收一室模型 有吸收二室模型

吸收速率常數 0.70±0.082 0.33±0.037

分布速率常數 / 0.17±0.033

消除速率常數 0.029±0.0038 0.046±0.0039

吸收半衰期 1.01±0.12 2.11±0.23

分布半衰期 / 4.23±0.91

消除半衰期 23.63±3.21 15.34±1.36

達峰時間 4.79±0.82 5.68±0.34

達峰濃度 0.37±0.041 0.47±0.046

藥時曲線下面積 12.92±0.71 11.67±0.51

總體清除率 0.15±0.019 0.016±0.0033

表觀分布容積 0.44±0.036 0.29±0.037

   

   法林獨立用藥組和華法林聯合血栓通用藥組，兩組的藥物濃度——時間曲線大致走向一致，但一些特征還是有細微差別，獨立用藥組的達峰時間要早于聯合用藥，但其達峰濃度要低于聯合用藥組。單獨給藥組還出現了雙峰現象。通過對比單獨給藥組和聯合給藥組的動力學參數：單獨給藥組的吸收速率、總體消除率、表觀分布容積、消除半衰期都要高于聯合用藥，但消除速率常數、吸收半衰期、達峰濃度、達峰時間要低于聯合給藥組。