大鼠血漿中華法林的藥物動力學研究(四)

四 討論

（一）華法林HPLC檢測方法

   華法林是雙香豆素類口服抗凝藥，水溶性較好，口服經胃腸道迅速吸收且吸收完全，少部分在肝臟被代謝，進入人體血循環的原形藥量幾乎沒有減少。正是因為其使用方便、生物利用度高等優點，華法林成為了目前臨床上使用最頻繁和廣泛的口服抗凝藥物。我國有較多心血管疾病患者，華法林作為心臟瓣膜置換術后的長時間抗凝藥物，在長期的抗凝治療中其抗凝效果是十分明顯的，但華法林的臨床應用缺陷也是很突出的：個體差異大、治療指數小、影響因素多等問題，劑量不足或者過量都會出現嚴重的問題，出血是華法林不良反應中最嚴重的反應。目前醫生對患者使用華法林后的抗凝效果監測的手段主要是PT以及經過校正之后的INR，但是PT和INR僅僅是一種定性的手段, 其數值的大小反應的是維生素 K 依賴因子Ⅱ、Ⅶ 、Ⅸ 、Ⅹ在該時間點其活性水平變化的總和，并不能完全體現此刻人體血漿中華法林含量的多少[21] ，有研究表明特別是在用藥初期PT和INR值與華法林血藥濃度沒有線性關系，所以有時會出現雖然監測患者的PT值和INR都在正常值范圍以內但還是出現例如出現牙齦出血類似的出血癥狀，特便是在患者剛開始用藥的初期會出現類似的情況。本研究建立的檢測華法林血漿濃度的高效液相色譜（HPLC）檢測方法，在本實驗選定的提取方法、流動相的配制，洗脫液的流速，檢測波長等條件下，從圖譜中可以明顯的看出藥物華法林峰旁邊沒有雜質峰（與雜質分離良好），出峰時間也較快；回收率實驗結果也表明藥物在大鼠血清中回收率較好達到95%以上；穩定試驗結果表明在設定的條件下實驗穩定性較好、重復性高，日內變異系數（日內精密度）和日間變異系數（日間精密度）分別小于5%、10%，完全滿足血漿中華法林鈉的定量分析。在整個實驗過程中在操作上并沒有遇見難題或者難以掌握的，說明該方法對于實驗人員是非常簡單易操作，同時回收率試驗、穩定性試驗以及出峰情況都表明該高效液相色譜（HPLC）檢測方法是簡便、快速、靈敏、準確的。目前大部分醫院的實驗條件也可以滿足該檢測方法的實驗要求且實驗操作也相對簡單、快捷。為了PT及INR值的準確性和科學性，利用該方法進行血漿華法林濃度的檢測，與其他兩個基礎指標共同分析患者的情況，可以指導臨床醫生合理調整給藥方案，減少抗凝并發癥的發生。

（二）華法林華法林藥代動力學

目前國內外關于血漿華法林濃度檢測方法建立的研究相對較多，但后續進行華法林藥物動力學的研究并不大多。正是關于華法林藥物的動力學研究的相對匱乏給醫生指導患者合理用藥造成一定的影響。本課題在上述研究背景下，通過建立的高效液相色譜（HPLC）檢測方法[22]，并應用于華法林在大鼠血漿中的藥物動力學研究[23]。首先華法林單獨給藥組的華法林血藥濃度-時間曲線圖出現雙峰的現象的原因可能有兩個：第一種可能性是華法林給大鼠灌胃，但藥物在胃中排出并不是一次性的，可能會分成幾次排出造成藥物到達小腸的時間不一樣，小腸吸收藥物的次數變為兩次，出現雙峰現象；第二種可能性是藥物的肝腸循環，華法林經膽汁或部分經膽汁排入腸道，在腸道中又重新被吸收，經門靜脈又返回肝臟，這也是造成雙峰現象的一種可能性；也有可能是兩種情況共同造成出現雙峰的現象。比較華法林獨立用藥組和華法林聯合血栓通用藥組，兩組的血藥濃度曲線大致走向一致，但還是存在明顯差異，聯合用藥的大鼠血漿中華法林的達峰濃度明顯高于華法林單獨用藥，根據這里的表觀分布容積主要是中央室的分布容積，因為聯合用藥比較適合用二室模型擬合。由于聯合用藥后總體的平均血藥濃度較高，所以其表觀分布容積小于一室模型（單獨用藥組）。清除率為單位時間內消除的表觀分布容積，因此聯合用藥組的總體清除率也低于單獨用藥組，因為是“總體”清除率和“表觀”分布容積，所以不可能為數學上的完整一致，而且藥物動力學參數均是軟件擬合的統計學概念，難以達到數學上的完全一致性，基本趨勢保持一致即可。復方血栓通膠囊是由三七、黃芪、丹參、玄參四種中藥組成膠囊，具備活血祛瘀，擴張血管，改善血循環的作用。聯合用藥組的AUC減小和Cmax增大，提示華法林與血栓通聯用時有增大出血的風險[24]，因此在當華法林與其他藥物合用時應加強治療藥物監測，特別是都具有抗凝血作用的藥物[25-26]。 

五 結論

本研究建立了一種大鼠血漿中華法林簡便、快速、靈敏準確的高效液相色譜（HPLC）檢測方法，經檢測表明，本方法適合用于大鼠血漿中華法林的定量檢測，并將該方法應用于華法林在大鼠血漿中的藥物動力學研究。研究發現華法林與血栓通聯用時，華法林的藥動學參數會受到血栓通的影響，聯合用藥組的AUC減小和Cmax增大，提示兩藥聯用時，血栓通會提高華法林的暴露的概率，在用藥初期患者的華法林血藥濃度很可能會超過安全值，增大患者的出血風險，因此醫生在臨床上給患者使用華法林時應該更加注意與華法林具有相似作用的藥物聯用的情況，適當的調節劑量，并及時積極進行跟蹤監測。

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