山楂中黃酮類化合物的測定方法概述 (5)(四)

對于提取黃酮類物質，目前使用最多的是超聲法[12]。其應用于山楂中黃酮的提取主要利用它的空化作用，就是一定頻率的超聲波作用于溶液的時候，溶液中尺寸適宜的氣泡發生共振現象，其強烈的沖擊波使得細胞壁破裂，有效成分會溶出。在綜合考慮等可行性因素的情況下，超聲波法明顯優于其他的提取法，提取時間縮短，產率也比較高，而且實驗可在室溫下進行，設備簡單宜操作，是提取黃酮類物質的一種有效方法

（四）山楂黃酮的分離純化

 1、 熱水提取法 

水是最廉價的提取溶劑，是地球最豐富的物質，無色無味無毒，對人體和環境無害，揮發性不大，具有真正的綠色環保意義。但用水作為提取溶劑時，從中藥材中提取的黃酮類化合物中雜質含量較多，往往因泡沫或粘液很多，給進一步分離 帶來許多麻煩，而且濃縮也會很困難。此外，水提取物容易發霉發酵。

2、堿性水、堿性稀醇浸提法 

中草藥中黃酮類成分多為多酚類化合物，因其結構中具有酚羥基，故可用堿性水或堿性稀醇液來提取中草藥中的黃酮類化合物。黃酮母核的多樣性主要是由黃酮本身骨架、環系的變化、氧化程度和數量而定，當堿的濃度過高，加熱時便破壞黃酮類化合物的母核 。 

3、有機溶劑熱回流及冷浸提取法 

根據雜質極性不同，可選用不同的有機溶劑(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇為提取溶劑。

4、超過濾法 

超過濾是一種能夠將溶液進行凈化、分離、濃縮的膜分離技術，對水溶性離子無法濾過，一般是利用進水壓與出水壓差來判斷超過濾膜是否有效，與活性碳類似，能大大提高黃酮類物質的提取純度，并且在提取生產過程中可以減少廢水排放。 

5、酶解法 

酶解法對于一些黃酮類物質被細胞壁包圍不易提取的原料比較實用。其原理是用相應的酶充分破壞以纖維素為主的細胞壁結構及其細胞間相連的果膠，使植物中的果膠完全分解成小分子物質，減少提取的傳質阻力，使中草藥植物中的黃酮類物質能充分釋放出來。

（五）黃酮類化合物的分析與鑒定

黃酮類化合物的結構鑒定

1、紙色譜（PC）：

1）適用于分離各種天然黃酮類化合物及其苷類的混合物。

2）混合物的鑒定常采用雙向色譜法。醫學教|育網搜集整理

3）同一類型苷元，Rf值依次為：苷元>單糖苷>雙糖苷。

2、硅膠薄層色譜：

1）適用于分離與鑒定弱極性的黃酮類化合物。

2）分離黃酮苷元常用的展開劑是甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）。

3、聚酰胺薄層色譜：適合于分離含游離酚羥基的黃酮及其苷類。

黃酮類化合物的基本結構構成為C-C-C方式，廣泛存在于包括眾多植物中，屬于植物次級代謝產物。黃酮類化合物具有來源廣、生物活性多、毒副作用小等特點，目前廣泛應用于臨床，古味伍絳木樨茶對其藥理作用進行分析如下。 1 心血管系統作用 1.1 抗心律失常作用  

動物實驗表明，黃酮對心肌缺血再灌注損傷組織，可以有效地減少其心律失常發作次數，減輕發作頻率，能對抗烏頭堿、哇巴因和氯仿誘發的心律失常，其可能的機制為總黃酮可降低心室肌動作電位幅值（APA），延長動作電位時程（APD）。 

1.2 抗動脈粥樣硬化 

動脈粥樣硬化（AS）疾病進程的一個主要原因為，低密度脂蛋白（LDL）的氧化修飾，黃酮類化合物具有抑制LDL氧化作用，抗平滑肌增殖，清除自由基，從而有效地對抗動脈粥樣硬化的損傷。 

1.3 擴血管作用 總黃酮具有血管緊張素轉化酶抑制劑（ACEI）的作用，抑制血管內皮素（ ET）的生成，擴張冠脈血管，改善心肌的血氧供應，對心血管系統起到改善作用，從而 起到血管擴張的作用。 

1.4 抗凝血作用 總黃酮體外給藥可抑制花生四烯酸和膠原纖維引起的血小板聚集作用，改善血液流變性，延長凝血酶原時間。動物試驗表明，大鼠皮下注射大劑量腎上腺素和冰水浸泡法，造出急性血瘀證大鼠模型，即血流變性呈軸稠狀態的實驗動物，通過飼喂山楂葉總黃酮（HLF），可顯著降低紅細胞（RBC）聚集指數、血漿比軸度，從而改善血瘀狀態。銀杏黃酮單獨應用其抗凝作用不如蚓激酶，兩者合用后抗凝效果加強，但溶栓作用并沒有改善。 

1.5 抗血脂作用 維生素D3加脂肪乳劑造成大鼠高脂血癥模型，在給予了麥胚總黃酮類后，可顯著提高大鼠高密度脂蛋白膽固醇含量，降低實驗性血清總膽固醇和三酚甘油含量。 

2 抗炎調節免疫作用 

黃酮類化合物具有顯著的抗炎作用。作用機理為作用于細胞正常的有絲分裂過程，調節細胞間相互作用的分泌過程，抑制肥大細胞和嗜堿性細胞釋放慢反應致炎物質，如中性粒細胞溶酶體酶、白三烯、組胺、前列腺素等，調節巨嗜細胞的吞噬功能，從而直到抗炎和免疫調節的作用。穿卜草中分離得到黃酮提取物可顯著清除炎性因子，雞蛋清致大鼠足腫脹、醋酸所致的小鼠腹腔毛細血管通透性增加、二甲苯所致的小鼠耳腫脹等急性炎癥反應，都有明顯的抑制作用。 3 抗菌抗病毒作用 

3.1 抗菌作用 甘草黃酮提取物在體外，可有效抑制白色念珠菌、黑根霉、灰葡萄抱、意大利青霉等真菌。同時對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、新型隱球菌、枯草桿菌、綠膿桿菌、煙曲霉菌、白色念珠菌等均有抑制作用，亦能明顯抑制的生長。 

3.2 抗病毒活性 黃酮類化合物對多種病毒具有抑制作用，蘆丁能抑制流感病毒、脊髓灰質炎病毒。黃芪總黃酮對人疤疹病毒（HSV21）感染的豚鼠皮膚，具有較好的抗病毒治療效果。異黃芪282甲醚能顯著抑制流感病毒。總之黃酮類對于流感病毒、呼吸道合胞病毒、脊髓灰質炎病毒、疤疹病毒、登革熱病毒、腺病毒、肝炎病毒、柯薩奇病毒、冠狀病毒等都具有一定的抑制作用。 

3.3 抗HIV活性 許多黃酮類化合物均有抗勻隕災活性，其作用的靶點均分別為作用于HIV逆轉錄酶、HIV蛋白酶、HIV整合酶，作用于HIV啟動子，沒有明確作用點的黃酮類化合物等。其中黃芩素可對抗中逆轉錄酶。 

三、山楂中黃酮類化合物的測定方法

一、利用紫外光譜測定黃酮類化合物的結構 

大多數黃酮類化合物在甲醇中的紫外吸收光譜由兩個主要吸收帶組成。出現在300～400nm之間的吸收帶稱為帶Ⅰ，出現在240～280nm之間的吸收帶稱為帶Ⅱ。不同類型的黃酮化合物的帶Ⅰ或帶Ⅱ的峰位、峰形和吸收強度不同，因此從紫外光譜可以推測黃酮類化合物的結構類型。