貝復(fù)濟（bFGF）凍干粉針的制備及質(zhì)量控制(一)

貝復(fù)濟（bFGF）凍干粉針的制備及質(zhì)量控制

摘要

堿性成纖維細胞生長因子，英文Basic Fibroblast Growth Factor的英文縮寫bFGF，是人生長因子中的一種，由155個氨基酸組成的相對分子量為16~18.5 KD。，能促進中胚層和神經(jīng)外胚層細胞分裂的多肽。其在醫(yī)藥和美容方面有廣泛的應(yīng)用如：

1.其主要生物學(xué)作用有:(1)作為血管生長因子。(2)促進創(chuàng)傷愈合與組織修復(fù)。(3)促進組織再生。(4)參與神經(jīng)再生等。

2.在美容方面，具有以下作用：（1）bFGF能夠改善細胞生長的微環(huán)境，促進彈性纖維和膠原蛋白的合成，使肌膚富有彈性，使皮膚處于滑嫩的狀態(tài)。(2)抗皺、防衰老作用，能夠促進成纖維細胞的生長發(fā)育，不斷以新的細胞取代老化細胞，因此產(chǎn)生防皺、祛皺作用。(3)美白、祛斑作用，更新衰老細胞，從而降低皮膚細胞中黑色素和有色細胞的含量，減輕皮膚色素的沉著。（4）防曬及曬后修復(fù)作用，能迅速修復(fù)受損細胞，減輕紫外線輻射對皮膚造成的傷害。（5）防粉刺、去疤痕作用。

現(xiàn)代采用基因工程方法人工合成bFGF，采用獨特的色譜技術(shù)分離純化提取bFGF。采用凍干制備bFGF凍干粉針。真空冷凍干燥技術(shù)簡稱凍干技術(shù)，運用此技術(shù)的設(shè)備稱為：真空冷凍干燥機或者凍干機。

真空冷凍干燥的過程中在低溫的環(huán)境下，同時在加工的過程中必須要使得周圍的環(huán)境處于高真空的狀態(tài)，所以這種加工方式非常適用對熱敏感度高和非常容易出現(xiàn)氧化問題的物質(zhì)的干燥，凍干技術(shù)有它的獨特優(yōu)點：（1）它是在低溫下干燥，不容易使蛋白質(zhì)、微生物之類產(chǎn)生變性或失去生物活力，這對于那些熱敏性物質(zhì)，如疫苗、菌類、毒種、血液制品等的干燥保存特別適用。（2）由于是低溫干燥，使物質(zhì)中的揮發(fā)性成分和受熱變性的營養(yǎng)成分損失很小，特別是化學(xué)制品、藥品和食品的優(yōu)質(zhì)干燥方法。（3）在低溫干燥過程中，微生物的生長和酶的作用幾乎無法進行，能最好地保持物質(zhì)原來的性狀。（4）干燥后體積、形狀基本不變，物質(zhì)呈海棉狀，無萎縮；復(fù)水時，與水的接觸面大，能迅速還原成原來的性狀，復(fù)水性好。（5）因系真空下干燥，氧氣極少，使易氧化的物質(zhì)得到了保護。（6）能除去物質(zhì)中95～99%的水分，更有利于制品的長期保存。

宋體小四號行文，字?jǐn)?shù)約300字。

關(guān)鍵詞　堿性成纖維細胞生長因子；氨基酸；多肽；真空冷凍干燥

　引言

正文要求論點明確、結(jié)構(gòu)合理、條理清楚、內(nèi)容完整、資料翔實并與論點相結(jié)合，同時要做到文字通順，引文規(guī)范。

非英語專業(yè)畢業(yè)論文字?jǐn)?shù)要求5000字以上，正本用A4紙寫作，用宋體小四號行文，且行距為“固定值”的18磅。

注釋應(yīng)放在相應(yīng)每一頁的最下面，即采用腳注形式。與參考文獻的格式一致外，還應(yīng)注明頁碼。腳注一律用小五號宋體字。

第1章文獻綜述

1.1對bFGF的研究

成纖維細胞生長因子（Fibroblast growth factor， FGF）是一類對源于中胚層和神經(jīng)外胚層的多種類型細胞具有促分裂分化活性的多肽生長因子，包括酸性成纖維細胞生長因子（Acidic FGF，aFGF）和堿性成纖維細胞生長因子（Basic FGF，bFGF）等多個成員（馮秀萍，曲紅艷，田海山，2008）。aFGF 可促進血管生長、傷口愈合、眼角膜上皮和內(nèi)皮損傷修復(fù)、眼晶狀體再生、神經(jīng)組織修復(fù)等（馬艷，金小寶，朱家勇，2006）。而bFGF 對多種細胞的生長、分化及功能有作用，可促進細胞中胚層源和神經(jīng)外胚層源的大部分細胞有絲分裂，還能改變大量細胞非有絲分裂的功能，生物學(xué)效應(yīng)廣泛，已應(yīng)用于臨床皮膚創(chuàng)傷和角膜外傷的修復(fù)（盧建香，2003）。

1.1.1輸入三級標(biāo)題

圖表格式：

每個表都應(yīng)有表說明，表說明包含表序與表題，居中排印在表的上方；表序與表題之間空一字距；獨表表示也同樣要求；表與表說明不能破頁。

表中不設(shè)“備注”欄，需要說明的事項可排印在表下方，表內(nèi)用星號“*”或圈碼“①、②”標(biāo)注在相應(yīng)內(nèi)容的右上角。表中的參數(shù)應(yīng)表明量和單位的符號，如表中所有參數(shù)的單位相同，可標(biāo)注在表的右上方或表說明之后；各欄單位不同則應(yīng)標(biāo)注在各欄表頭內(nèi)。表中不能用“同上”、“同左”一類詞代替具體數(shù)字；無某項目則空白；未發(fā)現(xiàn)用“...”；結(jié)果為零用“0”；同一欄的數(shù)字必須按位次上下對齊。

表隨正文，先見文字后見表；需要轉(zhuǎn)頁的表，應(yīng)在續(xù)表的右上角或左上角注明“續(xù)表×”，并應(yīng)重復(fù)排印表頭。

圖表與上下文之間各空一行。

表1-1樣本：

表11 簡單的多描述分配表

描述1 ζR (1−ζ)R

描述2 ζR（重復(fù)） (1−ζ)R

描述3 ζR（重復(fù)） (1−ζ)R

腳注就是可以附在文章頁面的最底端的，標(biāo)明引用文獻或者對某些東西加以說明，印在書頁下端的注文。腳注使用方式，例如[溫詩鑄. 摩擦學(xué)原理[M]. 北京：清華大學(xué)出版社. 2003:98]

1.2對bFGF制備的研究

劉士德, 張建華, 秦志宏, 余玉雯, 邢苗（2003）應(yīng)用基因重組的牛bFGF 免疫BALB/ c 小鼠, 通過細胞融合, 建立分泌抗bFGF mAb 的雜交瘤細胞株。應(yīng)用免疫沉淀技術(shù)鑒定抗bFGF mAb 的亞類;應(yīng)用基因重組的牛bFGF免疫青紫藍兔, 制備抗bFGF 的多抗血清;將抗bFGF mAb及兔抗血清用Pro tein A 親和層析純化后, 建立檢測bFGF 含量的ELISA 方法。

楊洪存，曲悅，馮秀萍（2009）以卡波姆940、甘油、1,2 丙二醇為基質(zhì)，加入復(fù)方保護劑（肝素鈉、人血白蛋白、甘露醇和HP-β-CD），制成bFGF 凝膠劑，觀察25 和4℃保存的穩(wěn)定性，并進行家兔局部刺激試驗、急性毒性試驗、促燒傷創(chuàng)面愈合試驗。結(jié)果bFGF 凝膠劑在25℃保存18 個月、4℃保存24 個月，效價維持在原效價的80%以上；局部用藥未見皮膚刺激反應(yīng)和急性毒性反應(yīng)；促家兔燒傷創(chuàng)面愈合的效果明顯優(yōu)于水溶液劑。制備的bFGF 凝膠劑安全有效，具有緩釋作用，穩(wěn)定性良好，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景

王建華，李學(xué)敏，陶曉軍等（2011）制備交聯(lián)風(fēng)干膠原膜和交聯(lián)凍干膠原膜。將殼聚糖-肝素納米粒滴于交聯(lián)凍干膠原膜上，再將濕態(tài)交聯(lián)風(fēng)干膠原膜置于復(fù)合納米粒子的交聯(lián)凍干膠原膜上風(fēng)干，即堿性成纖維細胞生長因子/雙層膠原基復(fù)合材料。采用急性全身毒性試驗、溶血試驗、熱原試驗和細胞毒性試驗評價其生物安全性。結(jié)果，堿性成纖維細胞生長因子/雙層膠原基復(fù)合材料為雙層結(jié)構(gòu)，一側(cè)表面致密，另一側(cè)疏松多孔。在其中間負載堿性成纖維細胞生長因子的殼聚糖-肝素納米粒子呈不規(guī)則球形分布于膠原膜內(nèi)側(cè)面；急性全身毒性試驗、熱原試驗、溶血試驗均為陰性，細胞毒性為0 級。說明堿性成纖維細胞生長因子/雙層膠原基復(fù)合材料具有良好的生物安全性，對機體無毒，符合ISO 10993-1 評價標(biāo)準(zhǔn)。

陳勇，王振遠（2013）采用殼聚糖為主要輔料制備涂膜劑，用二奎琳甲酸試劑盒測定制劑中bFGF 的含量，并進行皮膚刺激性實驗。制備的涂膜劑中bFGF 檢測濃度線性范圍為1～25 μg/mL（r = 0.999 7），平均回收率為100.4%，RSD 值為1.15%（n = 5）。該制劑制備工藝簡單，含量控制準(zhǔn)確，無皮膚刺激性。

沈彬，何勤，段宏等（2004）以聚乳酸一聚乙二醇共聚物為包裹材料, 采用復(fù)乳包囊法制備bFGF 一聚乳酸一聚乙二醇共聚物緩釋微球, 并對微球的形態(tài)學(xué)、粒徑分布、載藥量、包封率和體外釋藥等進行研究。所制備的微球表面光滑圓整, 球體均勻度好; 微球平均粒徑為1 .543 ±0.070um，平均徑距為1.273 ±0.08 ;載藥量和包封率分別為0.026 7 % 和65.32 % ; 微球的體外釋藥過程較為穩(wěn)定, 兩周釋藥率為59.98 %。bFGF緩釋微球比bFGF有明顯的緩釋作用。

　貝復(fù)濟（bFGF）凍干粉針的制備及質(zhì)量控制

2.1．貝復(fù)濟（bFGF）凍干粉針的制備與結(jié)果

2.1.1材料和儀器

     采用bFGF原液，人血白蛋白，甘露醇，注射用水，鹵化丁基橡膠塞（溴化），2ML西林瓶，TOFFLO-5凍干機，KJCS-2ES全自動濕法超聲波膠塞清洗機，SHZ-X西林瓶清洗機，H-GMS-B熱風(fēng)循環(huán)隧道烘箱，過濾器，配液罐，緩沖罐，SHZ-YGX-1灌裝機。

2.1.2滅菌條件