葛根芩連片的含量測定研究進展(一)

目錄

一、 葛根芩連片的簡介 2

二、 葛根芩連片中葛根素的含量測定實例 2

（一） 薄層掃描法 2

（二） 高效液相色譜法 3

（三） 小結 3

三、 葛根芩連片中鹽酸小檗堿的含量測定實例 3

四、 葛根芩連片中黃芩苷的含量測定實例 4

（一） 間接競爭酶聯免疫分析(ELISA)法 4

（二） 高效液相色譜法 4

五、 總結 5

參考文獻 5

一、葛根芩連片的簡介

葛根芩連片來源于《傷寒論》中的葛根芩連湯，由葛根、黃芩、黃連、甘草等4味藥材加工制成,方中以葛根為主，既能清熱解表，又能升發脾胃清陽之氣而治下痢；輔以黃芩、黃連苦寒之品以清胃腸之濕，使以甘草清熱解毒，調和諸藥，功能為解肌,清熱,止瀉,止痢。用于泄瀉痢疾,身熱煩渴,下痢臭穢。目前葛根芩連制劑有片、丸（微丸）、膠囊、顆粒 4 種劑型，而葛根芩連片是生產廠家最多，臨床應用最廣的劑型。葛根芩連片的化學成分眾多，但 4 味中藥化學基礎均較清楚：葛根的主要活性成分為大豆苷、大豆苷元、葛根素等黃酮類和皂苷類化合物；黃芩的主要活性成分為黃芩苷元、黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素等黃酮類化合物；黃連的主要活性成分為小檗堿、巴馬汀、黃連堿、藥根堿、表小檗堿等生物堿；甘草的主要活性成分為甘草酸、甘草次酸、甘草苷、甘草苷元等皂苷類和黃酮類化合物。

二、葛根芩連片中葛根素的含量測定實例

《中國藥典》中藥材和中藥制劑的質量控制基本都采用薄層色譜法、高效液相色 譜法（HPLC）、紫外分光光度法等方法測定中藥材和中藥制劑中的有效成分（指 標性成分）。葛根芩連制劑中葛根素的含量測定方法有薄層掃描法、高效液相色譜法（HPLC、RP-HPLC）、紫外分光光度法、毛細管電泳法、近紅外光譜法、酶聯免疫吸附測定法、超高效液相色譜法等。然而對葛根芩連制劑的整體質量控制的研究多集中在葛根芩連湯上。本文搜集了幾種較為典型的對葛根芩連片中葛根素含量測定研究進展。

（一）薄層掃描法

宋金榮等人選用薄層掃描法，以硅膠為固定相，氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(14:6:3:1)為流動相，參比波長為370nm，測定波長254nm，最終可知葛根素在0.5-2.5μg范圍內呈良好的線性關系 (r=0.9992)，平均回收率97.99%，RSD為2.10%。

秦文清的TLCS法實驗中用乙酸乙酯:甲酸:水(8:1:1)為展開劑，采用單波長反射鋸齒掃描,入=275nm,Sx= 3。結果:線性范圍在0.38-3.8ug,r=0.9993平均回收率為96.87%。

值得注意的是，兩次實驗人員均選用了結構及最大吸收波長與葛根素相近的蘆丁作內標,能減少提取、點樣、展開過程及儀器帶來的誤差,還可以克服板間誤差,樣品測定時,同板點對照品與由標準曲線求得的結果基本一致。兩次實驗中的共同點還有一點即本品片劑是葛根和其它組分的水煎或乙醇提取物濃縮稠膏與少量葛根細粉的制劑，由于乙醇溶解能力強，能提取多種成分，宋金榮在實驗中用乙醇為提取溶劑，將乙醇提取液水浴蒸干，用水飽和的正丁醇多次提取，使葛根素與其他不能溶于正丁醇的成分得到了有效的分離，使層析展開時能達到良好的分離效果，葛根素斑點分離效果良好，不受其他斑點干擾。在這次實驗中，實驗人員曾采用乙酸乙酯作為提取溶劑，索氏提取器回流5h，依法測定，結果回收率僅為83.46%，說明乙酸乙酯不能將葛根素完全提取出來，不宜作為葛根芩連片中葛根素的提取溶劑。同時秦文清采用乙醇水溶回流Ih,用定性實驗表明其使葛根細粉中的葛根素提取完全。

（二）高效液相色譜法

李向陽,李振國則用HPLC對含量測定的色譜條件、測定范圍、樣品測定條件等進行了驗證。實驗可知李向陽等人采用的色譜條件如下：色譜柱為HypersilC18柱（4.6mm×250mm,5μm),柱溫40℃;進樣量5μL,甲醇-乙腈-水(6:9:85)為流動相,流速1.0mL/min，檢測波長為250 nm，理論板數按葛根素計算不低于2000。按此測定,葛根素的保留時間為11.8min。葛根素在0.0776-0.7760μg呈良好的線性范圍(r=0.99997);平均回收率為101.02%,RSD為2.91%。

譚生建等人選擇的話實驗條件分別是：流動相:甲醉-水(23:77);流速:1.0ml/min;色譜柱溫度:35℃;檢測波長:250nm;進樣體積10μl;外標法計算含量。理論板數按葛根素峰計算不低于2000;葛根素濃度在5μg/ml-80μg/ml范圍與色譜峰面積呈線性關系;R=0.9999;回收率及RSD分別是97.6%、1.8%。

在《中國藥典》 2005年版一部中粉葛藥材含量測定項下供試品溶液的制備方法為30%乙醇加熱回流提取。本品為葛根等藥材經提取制成的中成藥制劑,李向陽等人經過試驗,用30%乙醇提取制成的供試品中雜質含量較高,連續進樣易導致柱壓上升、柱效下降。根據葛根素易溶于甲醇的理化性質,以甲醇為溶媒超聲處理制備供試品溶液,制得的供試品色譜較為理想,重現性較好；譚建生曾用甲醇做提取溶劑,分別經水浴回流提取30、60和90min考察,確認60min可將葛根素提取完全,因此確定回流提取lh。在這些色譜條件下，供試品色譜中葛根素峰形對稱,與雜質峰可達基線分離。其次樣品液在室溫下(約22℃)置棕色量瓶中,48h內葛根素含量無明顯改變。

（三）小結