梔子及其制劑中主要成分的含量測定方法概述(二)

 桅子油約占桅子果實的12%以上,其富含亞油酸、粘度低、穩定性好,具有鎮靜、抗驚厥、催眠以及促進學習記憶等功效。桅子油的主要提取方法有壓榨法、有機溶劑浸提法、水蒸氣蒸餾法、以及超臨界流體萃取法和超聲波法。

（五）其他

除上面所述幾類主要成分外，梔子還含有黃酮類、多糖類、香豆素類、喹寧酸、木質素、單萜苷類及Mn、Zn、Ca、Fe、Cu等微量元素。嚴歡等[11]采用 UHPLC⁃Q⁃TOF⁃MS 聯用儀及 ESI 正離子模式采集檢測，在以流速為0.3 ml/min的情況下，用0.1％甲酸水溶液⁃乙腈為流動相進行梯度洗脫并采用以 Peakview 質譜分析軟件分析數據,根據數據結果所提供的有關信息并結合相關參考文獻，分析發現從梔子花中共檢測到 31 種化合物，主要包括環烯醚萜類、三萜類和黃酮類。肖日傳等[12]采用多波長 HPLC-DAD，同時測定梔子不同部位7 種化合物的含量,發現去乙酰車葉草酸甲酯在根和莖中含量較高。唐娜娜等[13]采用薄層色譜、破股及凝膠柱色譜法對梔子進行分離純化，通過理化方法和波譜數據進行結構鑒定，結果顯示從梔子中分離得到多個化合物，鑒定結果為丁香酸、油酸、十八酸、槲皮素、蘆丁、谷甾醇、京尼平苷、胡蘿卜苷等。

三、梔子藥理活性研究

（一）梔子黃色素的功效

梔子黃色素是梔子果實中主要色素之一，是一種混合類型色素，梔子黃色素有著水溶性、耐酸堿的優點，是世界上唯一的水溶性類胡蘿卜素，有效成分包括西紅花素和西紅花酸。梔子黃色素安全無毒性且資源豐富，經研究表明梔子黃色素正如同其它的類胡蘿卜素 ,具備多種生物學功能，有一定的藥理作用及營養價值。梔子黃色素有較強的抗氧化功能，具有保肝、降血糖、降血脂、改善睡眠等功能。藏紅花酸有多不飽和共軛烯酸結構，具有多種生物活性，包括保護肝損傷、降血脂及抗腫瘤活性，不僅能顯著抑制致突變劑誘發的皮膚癌，而且能夠在分子水平抑制原癌基因的啟動和癌細胞 DNA 和 RNA 的合成。黎硯書[14]等研究發現梔子黃色素類單體西紅花酸、西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅲ對淀粉負荷和蔗糖負荷糖尿病小鼠均有降血糖作用。陳麗萍等[15]研究發現一定濃度下的梔子黃色素具有較強的體外清除自由基能力及顯著的抗氧化活性，能夠有效地清除羥基、DPPH、ABTS等自由基。李茂星等[16]研究中藥梔子中梔子黃色素對高原缺氧運動性疲勞的改善作用，實驗結果表明梔子黃色素可能通過提高氧化應激能力、增強能量代謝酶活性、增加能源物質儲備、減少不良代謝產物生成與堆積等多方面發揮其抗疲勞功用。

（二）梔子苷的藥理活性

梔子苷是梔子屬植物的有效活性成分之一，現代藥理研究證實梔子具有解熱抗炎，防止血栓形成及抗氧化作用。白龍梅等[17]通過分別建立高純度多巴胺能神經元培養體系、多巴胺能神經元和星形膠質細胞混合培養體系，予以梔子苷預處理后再加入脂多糖作用24h，觀察多巴胺能神經元的生存率、TH m RNA的表達及培養基中TNF-α、NO、IL-6、MMP-9和GDNF含量的變化。發現梔子苷通過星形膠質細胞發揮神經保護作用，并呈劑量依賴性。李利娟等[18]采用雙側頸總動脈結扎制備VaD大鼠模型，予VaD大鼠不同劑量梔子苷〔25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、75 mg/(kg·d)〕灌胃，連續治療4周后，進行水迷宮實驗和腦組織病理檢查，結果顯示梔子苷對血管性癡呆大鼠模型的認知功能損害有防治作用，具有劑量依賴性。

四、梔子及其制劑中主要成分的含量測定方法

（一）高效液相色譜法

高效液相色譜法具有高效、高靈敏度、分析速度快、適用性強等特點，而被研究人員常用測定梔子中藏紅花苷類、梔子苷等成分的含量測定。曾彥雯等[19]通過實驗探究梔子中活性成分梔子苷的高效液相色譜測定分析條件，發現用高效液相色譜法測定梔子中活性成分梔子苷的最佳色譜柱為C18色譜柱，最佳流動相為甲醇-水，在此條件下，能夠有效分離梔子中活性成分梔子苷，且保留性能良好同時能避免使用磷酸等鹽類物質對色譜柱造成的傷害及使用乙腈為流動相造成檢測成本過高問題。發現當流動相為甲醇-水（60：40時），梔子苷的保留時間控制在 10min 中之內，能有效避免梔子苷保留時間過長等問題，得到的分離度和，峰形都滿足色譜分析的需求。張作軍等[20]使用 DAD 檢測器，以甲醇 -0.3% 的磷酸溶液為流動相，洗脫梯度為0 ～ 30 min，甲醇 25% ～ 95%，0.3% 磷酸溶液 75% ～ 5%，柱溫、流速分別為 40℃、1.0 mL/min，Hypersil ODS 參數為5 μm，250 mm×4.6 mm，在檢測波長為 237 nm 的條件下對臨床上常用的丹梔逍遙合劑中梔子苷進行檢測。結果顯示丹梔逍遙合劑中梔子苷線性范圍為 0.20 ～ 0.70 μg（r ＝ 0.9998），其平均含量為 4.26 mg/g，其平均回收率達 101.4%。表明采用高效液相色譜法測丹梔逍遙合劑中梔子苷含量耗時短、準確率高、易控制制劑質量，使用方便，應予推廣。

（二）薄層掃描法

彭金年等[21]先將超聲提取梔子樣品，后用硅膠 G 高效薄層板條帶點樣，以氯仿 － 乙酸乙酯 － 無水甲醇( 3∶ 2∶ 1，V/V/V) 為展開劑上行展開，在 240 nm 波長下進行掃描檢測。研究發現在 0．240 ～ 0．640 μg/ml 范圍內，梔子苷濃度與峰面積呈良好線性關系，相關系數 r =0．999 54，平均回收率為 100． 45% ，RSD 為 1.69%，說明薄層掃描法可用于贛南野生黃梔子中梔子苷的含量測定，且使用方便、準確度及重復性好。張雅麗等[22]以藁本內酯、柴胡皂苷 b2 、白術內酯Ⅲ、芍藥苷、梔子苷、甘草苷、丹皮酚和6-姜辣素為指標性成分，分別對加味逍遙提取物和加味逍遙片進行薄層色譜鑒別。結果顯示薄層色譜法可鑒別出以上8種成分。張芳等[23]采用薄層色譜法對黃柏八味膠囊中不同組分進行鑒別，同時優化了影響色譜分離效果的主要因素。結果顯示梔子、黃柏、甘草、蓽撥和紅花主要成分分離效果較好，色譜清晰。

（三）薄層-紫外分光光度法

薄層-紫外分光光度法可用于測定梔子中京尼平苷、梔子苷的含量，且該方法簡便方便，靈敏度和準確性好。趙成城[24]等在 25 ℃條件下測定了京尼平苷在最大吸收波長 238 nm 處的吸光度，結果顯示此法線性范圍 6. 4 ～ 38.4μg/ml 內，r = 0.9991，平均回收率為 97.68 % ，RSD =2.72 % ( n = 6) 。溫愛平等[25]采用薄層一紫外分光光度法對沙日一湯中梔子苷進行分離和測定，以237nm為測定波長，用硅膠GF254與甲基纖維素鈉調勻再用自動鋪板器涂布于潔凈的玻璃板上晾干、活化，以氯仿:甲醇(3:l)作為展開劑，結果顯示分離較好，回收率高，結果較滿意。 劉永喜等[26]將洪林 -5湯 先用乙醚脫脂，再用甲醇提取，使用硅膠 HF254板，以氯仿 -甲醇 -氨水 ( 17∶ 3∶ 0. 2)為展開劑，分離出梔子苷后，在 238nm處測定了梔子苷的含量。測定結果結果表明該法準確和精密度較高。吳龍堂等[27]用甲醇提取沙日嘎- 4湯，使用硅膠HF254薄層板，用氯仿-甲醇-氨水(4∶1∶0.2)做為展開劑，梔子苷被分離出后，再使用紫外分光光度法測定在波長238nm處梔子苷的含量。且測定結果準確，精確度較高。

五、研究展望

 梔子屬衛生部頒布的第l批藥食兩用資源，具有護肝利膽、鎮靜降壓、消腫止血等作用。在中醫臨床常用于治療黃疸型肝炎、高血壓、扭挫傷 、糖尿病等癥。此外，梔子還可被用做染料及加工成色素。梔子果實有著極高的藥用價值，但也存在眾多問題，如有效成分難分離、產量低、毒性研究較少等問題。但就目前而言 ，我國對梔子資源的利用存在一定問題 。我國梔子種植面積大，資源豐厚但我國大多數企業生產的梔子黃色素沒有達到國際標準，只能以半成品的形式對外出售。因此，進一步開展梔子黃色素和高純度梔子苷等有效成分的提取工藝及梔子含量測定方法研究具有重大意義。梔子在果實、花、葉、根等部位的成分實際應用方面存在較大的差異，梔子的花、葉、根中的化學成分也需進一步研究，結合與時俱進不斷更新的含量測定技術，為梔子中有效成分的利用提供科學合理的理論依據。

隨著人民生活質量的不斷提高，對健康問題天也越來越受關注。我國有著豐富的梔子資源，進一步加強對梔子研究，綜合開發出多種梔子天然安全產品及藥品，具有重要的現實意義。

 

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