山楂中黃酮類化合物的測定方法概述 (4)(二)

4　抗腦缺血作用：山楂葉總黃酮可明顯提高模型小鼠腦組織LDH及SOD活力，對局灶性腦缺血再灌注損傷小鼠腦組織有明顯的保護作用，其機制與抗氧化有關。

5　對血液流變學作用：山楂總黃酮3個劑量(80、40、20 g/kg)均有降低急性血瘀模型大鼠全血比黏度、血漿黏度和紅細胞壓積的活血化瘀作用。山楂醇提取物對中、低切全血比黏度有顯著降低作用。

6　對血管內皮細胞的作用：不同劑量的山楂對氧化修飾的低密度脂蛋白引起的人臍靜脈內皮細胞(EC)損傷和對EC的直接作用表明，山楂能抑制低密度脂蛋白的氧化修飾，減少脂質過氧化物的形成，阻斷有害物質的產生，可通過直接作用于內皮細胞，調節內皮細胞功能，增強內皮細胞對有害因子的抵抗力和耐受性，從而保護內皮細胞免受損害。

7  消化系統作用：山楂可單味應用，亦可與神曲、麥芽、萊菔子等配伍，加強消食化積之功。其含維生素C、維生素B、胡蘿卜素及多種有機酸，口服能增加胃中消化酶的分泌，所含蛋白酶、脂肪酸，可促進肉食分解消化。

8　糖代謝及抗氧化作用：應用6%的山楂水煎劑可明顯降低高脂飲食大鼠空腹血清胰島素和MDA水平，表明其可改善高脂飲食大鼠的胰島素血癥，增強機體抗脂質氧化作用，其機制可能與調節糖代謝有關，其藥效物質基礎可能與金絲桃苷和熊果酸有關。

山楂具藥食雙重價值，我國盛產山楂，資源豐富，經濟物廉。近幾年來，其在心腦血管系統疾病中的防治作用成為許多學者的研究熱點，有希望開發成為新型的防治心腦血管系統疾病的藥物。不僅可將山楂開發成各種保健品，還可提取活性成分，制成制劑用于臨床，有著廣闊的開發前景。

（二）、山楂中含有的黃酮類化合物

黃酮類化合物(flavonoids)是一類存在于自然界的、具有2-苯基色原酮(flavone)結構的化合物。它們分子中有一個酮式羰基，第一位上的氧原子具堿性，能與強酸成鹽，其羥基衍生物多具黃色，故又稱黃堿素或黃酮。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結合成苷類，小部分以游離態(苷元)的形式存在。絕大多數植物體內都含有黃酮類化合物，它在植物的生長、發育、開花、結果以及抗菌防病等方面起著重要的作用。生長在南太平洋所羅門群島中的原珍向天果這種野生植物同樣含有豐富的黃酮化合物成分，具有很廣范的藥用功效，馬來西亞草藥目錄》中記載，原珍向天果味苦、澀、性涼，解熱、收斂、種仁強壯!其種子主治:糖尿病、高血壓。

（三）、黃酮類化合物一般的測定方法

黃酮類化合物是廣泛分布于自然界中的一類化合物，生活中常見的食品茶葉、豆類、蔬菜、蜂蜜等都含有大量的黃酮類化合物。黃酮類化合物具有C6-C3-C6的基本骨架，是許多植物成分的活性化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。

1.分光光度法 

　　分光光度法主要適用于總黃酮的測定，具有操作簡便、快速、準確度及精密度較好的特點。目前黃酮類化合物測定法有直接測定法和比色法。直接測定法直接以黃酮類化合物為對照物測定樣品中的此成分的含量，比色法是將化合物加入顯色劑后測定吸光度再進行換算測定，其中常用的顯色劑有Al（NO3）3和AlCl3。直接測定法和比色法的選擇要綜合考慮，樣品中成分是否會與顯色劑發生沉淀反應、樣品成分的復雜性等都會影響結果的準確性， 在NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系中， 堿性條件經常會影響結果的準確性和穩定性， 只有物質中含有鄰二酚羥基， 并且鄰二酚羥基的鄰位沒有取代時， Al（NO3）3比色法才在 510 nm左右有最大吸收。 

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2. 薄層色譜法（TLC） 

　　薄層色譜法是一種進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法，薄層色譜法主要用于黃酮類化合物的定性和半定量分析，可同時測定多個樣品，跟高效液相色譜法相比，薄層色譜法儀器設備簡單，操作方便，但由于其影響因素較多，靈敏度和精確度方面不如高效液相色譜法。 

　　

3.高效液相色譜法（HPLC） 

　　高效液相色譜法適用于極性大、沸點高、分子量大、熱穩定性差的化合物分析，是黃酮類化合物分離檢測中使用非常廣泛的一種方法，具有效率高、靈敏度高、分離效率高等優點。高效液相色譜法采用液體為流動相，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。黃酮類化合物的分離中常用的色譜柱是C18柱，對復雜化合物的分析經常采用梯度洗脫系統，實現高效率的分離，紫外檢測器、二極管陣列檢測器是黃酮類化合物分析中最常用的檢測器，具有靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫的特點。 

4、毛細管電泳法（CE） 

　毛細管電泳是以毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅動力的微分離分析技術，有多種分離模式，毛細管區帶電泳，膠束毛細管電泳，毛細管等速電泳，毛細管凝膠電泳等。黃酮類化合物分離中經常應用毛細管區帶電泳和膠束毛細管電泳。分離中常用的緩沖溶液是硼砂，常用的緩沖體系有硼砂-氫氧化鈉，硼砂-磷酸二氫鈉，硼砂-硼酸體系，少量報道也采用過中性磷酸鹽的體系。在堿性條件下，黃酮類化合物中的順式二羥基與硼酸形成帶負電荷的硼酸類配合物，在電場作用下發生移動

4.（四）、有關山楂中黃酮類化合物測定的實例

1、章弘揚等采用高效液相色譜-質譜法 鑒定了山楂中的綠原酸、原花青素 B2、表兒茶素、金絲桃苷、異槲皮苷，采用反相色譜-二極管陣列檢測法同時定量測定了其含量。

2、對山楂葉中的黃酮類化合物進行HPLC 分析 ，多以金絲桃苷和以牡荊素為標準品，但牡荊素鼠李糖苷為山楂的專屬性成分，以牡荊素鼠李糖苷為標準品進行了山楂葉中黃酮類化合物的HPLC分析。在實驗過程中，發現此流動相體系的選擇比較困難，經過反復摸索，選擇了流動相配比，分離效果較好，在此條件下牡荊素鼠李糖苷與山楂中其它成分達到較好的分離。 在提取山楂葉中的黃酮類有效成分時，比較了傳統工藝和超高壓提取工藝，超高壓提取方法的優點是提取速度快、雜質少、收率高，因此采用了超高壓提取技術進行了黃酮類化合物的提取，然后采用HPLC進行檢測，大大縮短了樣品的分析測試時間。

實驗結果表明，山楂葉中的總黃酮和牡荊素鼠李糖苷的含量，既不是花期最高，也不是秋季摘果后最高。而是從花期（5月下旬）開始，逐漸增高，到8月份達到最高，然后隨著果實的成熟，含量逐漸下降，到落葉時（10月下旬）含量最低。因此，如果以提取山楂葉中的黃酮類化合物為目的，應該選擇8月初的山楂葉，此時的總黃酮和牡荊素鼠李糖苷含量都是最高，為合理的采收和利用提供了 理論 依據。為充分利用有限的中藥資源，應該選擇最佳的采收期，從而提高中藥的利用價值。

3、黃酮類化合物無論是游離的黃酮甙元還是黃酮甙都易溶于乙醇、甲醇等溶劑中。根據文獻,丙酮的提取效果比乙醇、甲醇好,以70%丙酮提取最好。但是由于丙酮價格較貴且含有毒成分,生產上一般不用。乙醇的提取質量分數低于60%時過濾出現困難,而且為了后續的過濾、回收溶劑、干燥等操作也比較容易,所以以70%乙醇溶劑進行提取。

山楂籽粉碎粒度對浸提效果的影響粒度不同浸提效果也不同,粒度小浸提效果好,但粒度不宜過小,否則過濾出現困難。以過20目、40目、70目、140目篩的幾種粒度的山楂籽粉末進行比較,結果表明,以140-70目山楂籽粉末浸提效果最好。

（五）、參考文獻

1.Li B, Zhang K, Cao W D, et al. Determination of hyperoside in hawthorn leaves byHPLC［J］.Chinese Pharmaceuticals (中國藥業)，2003，12(12)：37

2.Zhong Y, Yang S J, Wang J, et al. Determination of Vitexin in leaf of Crataegus pinnatifida Bge. by HPLC ［J］. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research (時珍國醫國藥)，2000，11(10)：871.

3.Sun J Y, Yang S B, Li G H. Investigation on method speciality in identifying Fructus Crataegi with vitexin rhamnoside［J］.Zhong Yao Cai (中藥材)，2001，24(12)：859.