梔子及其制劑中主要成分的含量測定方法概述(二)

2.1.3薄層一紫外分光光度法以及測定實例。

紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用于鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。當光穿過被測物質溶液時，物質對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關系圖即得被測物質的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin。物質的吸收光譜具有與其結構相關的特征性。因此，可以通過特定波長范圍內樣品的光譜與對照光譜或對照品光譜的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質。用于定量時，在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數法求算出樣品溶液的濃度。薄層層析又稱薄層色譜，色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質的一種重要實驗技術，屬固—液吸附色譜，兼備了柱色譜和紙色譜的優點，一方面適用于少量樣品（幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時，把吸附層加厚加大，因此，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物質。是將吸附劑、載體或其他活性物質均勻涂鋪在平面板（如玻璃板、塑料片、金屬片等）上，形成薄層（常用厚度為0.25毫米左右）后，在此薄層上進行層析分離的分析方法。

薄層一紫外分光光度法是有薄層層析和紫外-可見分光光度法組合使用的一種分析方法。

測定實例--《梔子藥材中京尼平苷含量的薄層-紫外分光光度法測定》

目的：建立薄層-紫外分光光度(TLC-UV)法測定梔子藥材中京尼平苷的含量。

方法：在25℃測定京尼平苷在最大吸收波長238 nm處的吸光度。

結果：此法線性范圍6.4～38.4 μg/ml內,r=0.999 1,平均回收率為97.68％,RSD=2.72％(n=6)。

結論：用此方法可測定梔子中京尼平苷的含量.方法簡便,靈敏和準確,結果可靠.  )。

2.2不同測定方式的優劣。

2.2.1高效液相色譜法優點和劣勢。

優點：分離效率高，選擇性好，檢測靈敏度高，操作自動化，應用范圍廣；

與氣相色譜法相比具有不受試樣的揮發性和熱穩定性限制，應用范圍廣；流動相種類多，可通過流動相的優化達到高的分離效率；一般室溫下分析即可，不需高柱溫。

     缺點：分析成本高，液相色譜儀價格及日常維護費用貴，分析時間一般比氣相長。

2.2.2薄層掃描法優點和劣勢。

優點：操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快，一般僅需15～20min；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有0.01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。

缺點：對生物高分子的分離效果不甚理想 [3]。

2.2.3薄層一紫外分光光度法優點和劣勢。

優點： 紫外分光光度法與其它光譜分析方法相比，其儀器設備和操作都比較簡單，費用少，分析速度快、 靈敏度高、選擇性好、用途廣泛。薄層分析具有操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快。薄層一紫外分光光度法繼承了倆種測量方式的優點。

缺點：對測定梔子及其試劑成分含量來說準確度不高。

2.3測定梔子及其制劑中主要成分的含量最優的方法介紹。

用高效液相色譜法測定梔子及其制劑中主要成分的含量，此方法專屬性強、操作簡便、精密度和穩定性良好。

3梔子及其制劑中主要成分的含量測定方法總結。

梔子來源于茜草科Rubiaceae植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實。梔子中含有40余種生理活性物質, 其中為國內外所公認的中藥梔子有效成分為環烯醚萜類物質。梔子所含的環烯醚萜類物質包括梔子苷、京尼平苷、羥異梔子苷、梔子苷酸等,其中活性成分最高的是梔子苷和京尼平苷。梔子苷又是生產梔子藍、梔子紅、梔子紫的中間體和生藥品的有效單體。因此, 對梔子苷的分離、純化、結晶和含量測定成為對梔子深度開發的關鍵技術。目前,對梔子苷的分離可以與α - 藏花素的分離同步進行。較為成熟的方法是采用大孔樹脂吸附解吸的技術。選用的樹脂多為弱極性和無極性, 如HP20、XAD22、HPD2100、X25 、NKA等等。文獻報道梔子苷的提純方法主要有: 鉛鹽沉淀法、活性炭除雜法、硅膠吸附法等。通過比較研究得出的初步結論是, 上述方法作為研究尚可,但無法進行工業化生產。其主要問題在于: 工藝復雜、物耗過大、收得率低, 而且大量使用有毒有害的試劑,如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮、鉛鹽等。不符合食品、藥品的生產規范。而采用柱層析法則完全可以達到梔子苷純化的目的。選用安全、無毒、合適的固定相和流動相，在一定的吸附量、溫度、pH、流速、流量等條件下, 可以有效地將梔子苷的含量由50%純化到95%左右, 為梔子苷的結晶創造必要的條件。

 梔子的化學成分比較復雜，主要有梔子苷類、環烯醚類、藏紅花苷類等。梔子中提取梔子苷的方法也有多種多樣，常見的方法有以下幾種：浸取發、超聲波萃取技術、超臨界流體技術以及微波萃取技術。梔子的主要成分測量的方法有薄層紫外法 、薄層掃描法、高效液相色譜法等[5]，薄層紫外法和薄層掃描法準確度不高, 高效液相色譜法是對梔子苷準確、快速的定量測定方法,為其質量標準的制定[4]。梔子的化學成分決定了梔子的應用范圍，梔子在醫藥中應用廣泛，可以用來解熱、抗炎、鎮靜、護肝和凝血等諸多方面的作用，隨著提取科技、醫藥科技等科學技術的發展，梔子中的有效成分將得到更好的發展。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.藥典（四部）[M]. 北京：中國醫藥科技出版社. 2015：52-96

[2] 國家藥典委員會.藥典（相關品種超高壓液相方法分析）[M]. 北京：中國醫藥科技出版社. 2015：108-296

[3]萃取方法分類報告[J].中醫藥網，2016 (1):6-65.

[4]梔子及其制劑中梔子苷含量測定方法研究進展[J]..中國中醫藥信息雜. 2015年7月第12卷第7期:2-6

[5]梁大同.反相高效液相色譜法測定梔子及其制劑中梔子苷的含量[Z].