黃連及其制劑中生物堿類化合物的HPLC測定方法概述(三)

俞永梅，牟娜，張平選用甲醇、乙酸乙酯和三氯甲烷3種不同提取溶劑，加酸與不加酸以及酸的用量，超聲、回流等不同提取方法，過中性氧化鋁柱與不過柱對提取效率的影響。結(jié)果用甲醇-鹽酸(100∶1)超聲30min后過中性氧化鋁柱能將藥材中的生物堿提取完全，且雜質(zhì)較少。分別考察了不同流動相(乙腈-磷酸二氫鉀系統(tǒng)、乙腈-庚烷磺酸鈉與磷酸二氫鉀系統(tǒng)及乙腈-0.1%磷酸溶液系統(tǒng))用磷酸調(diào)不同pH值、不同柱溫、不同檢測波長下3種生物堿與其他成分的分離情況。因藥根堿含有酚羥基，流動相制備時應注意控制pH值，使得鹽酸藥根堿與相鄰的峰達到分離要求，且峰形較好。結(jié)果以乙腈-2.5mmoL·L－1庚烷磺酸鈉和50mmoL·L－1磷酸二氫鉀溶液(含0.14%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0)=27∶73，檢測波長為348nm，柱溫35℃時，基線平穩(wěn)，分離較好。鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿、表小檗堿與相鄰的峰都達到分離的要求，峰形較好。綜上所述，高效液相色譜法測定黃連上清片中3種生物堿法測定黃連上清片中鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿、表小檗堿的含量，方法靈敏、準確、專屬性強，重復性好，可作為黃連上清片的質(zhì)量控制方法。

（三）HPLC測定黃連上清片中黃連素的含量

黃連降糖片為開封市某醫(yī)院自制制劑，由黃連、酒大黃、知母、麥冬、地黃、牡丹皮組成，具有清熱生津、降糖止渴的功效，主治熱盛津傷型消渴病。方中黃連清熱保津、瀉火解毒，是為君藥，其有效成分為小檗堿。張健，張蒙蒙采取HPLC法，采用C18(250mm×4．6mm，5μm)，以乙腈－磷酸鹽緩沖液［0．05mol/L磷酸二氫鉀溶液和0．05mol/L庚烷磺酸鈉溶液(1∶1)，含0．2%三乙胺，用磷酸調(diào)pH值至3．0(41∶59)為流動相，流速1．0mL/min，檢測波長263nm。分別精密量取對照品溶液2，5，10，20，30，40μL，μL，按上述色譜條件進行分析，以對照品進樣量(X，mg/L)對峰面積(Y)作線性回歸，回歸方程為:Y=82．40X－0．035(Ｒ=0．9995)。鹽酸小檗堿在0．076～1．528μg范圍內(nèi)進樣量與峰面積值呈良好線性關(guān)系。取同一批樣品，，分別測定鹽酸小檗堿含量，平均含量為34．77mg/片，ＲSD為0．6%，表明本方法重復性良好。

四、總結(jié)

總之，本實驗所得方法操作簡便，并經(jīng)過了方法學驗證，結(jié)果表明，本方法有較好的專屬性，精密度好，準確度高，并有良好的重現(xiàn)性，提取回收率接近100%，可以作為復方黃連素片中鹽酸小檗堿的含量測定，用于該制劑的質(zhì)量控制，以確保其臨床用藥效果。

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