黃連及其制劑中生物堿類化合物的HPLC測定方法概述(二)

小檗堿主要來源于毛茛科植物黃連，其靜脈注射或口服對麻醉(犬、貓、兔)或不麻醉大鼠均可引起血壓下降。在一般劑量或小劑量時，它能興奮心臟，增加冠狀動脈血流量;大劑量則抑制心臟，即使再增加劑量，在離體蟾蜍或貓的心臟上亦無起搏現象。降壓機制可能是直接興奮毒蕈堿樣受體。,

3. 抗菌、抗病毒、殺蟲作用

黃連小檗堿對革蘭氏陽性和陰性細菌、原蟲及各型流感病毒、新城病毒、真菌類均有抑制作用,對鉤端螺旋體在試管中有相當強的殺滅作用。在體內外黃連小檗堿均有抗阿米巴原蟲的作用,機理在于抑制微生物DNA及蛋白質合成。2-烴基取代的4(1H)-喹諾酮生物堿類均有一定的抗菌作用，對金葡菌與表葡菌的最小抑菌濃度為1.0 mg /ml。

二、黃連的概述

（一）黃連的藥理作用

黃連是一味古老抗菌藥，長期以來，就應用于臨床醫學上，黃連解毒湯具有降熱、清火、解毒的療效對于老年癡呆性疾病的治療也有所研究。近年來，隨著醫學界不斷的發展，對于黃連的藥理作用的研究也越來越深入，越來越廣壇，在國內外用于多種疾病的治療。通過研究發現，中藥黃連還具有抗必律失常、抗菌和抗病毒、抗炎、抗卵瘤、降血糖、保護胃粘膜、抗血小板聚集口等藥理作用。新的藥效的發現，尤其是在降血脂、抗癌巧日改善必腦血管功能方面的藥效，對于疾病的治療都具有較好的效果，送為進一步開發利用傳統中藥黃連提供了科學依據。

（二）黃連中的生物堿類成分

1.小檗堿

小檗堿又稱黃連素，是一種十分常見的藥物成分，屬于季銨型異喹啉生物堿。小檗堿存在于小檗科和蕓香科等眾多的植物里，可以從一些常見的傳統中藥中提取出來，以黃連、黃柏以及三顆針等眾多品種為例。黃連素的結構為氮雜環化合物，季銨鹽結構具備共扼雙鍵，在生物系統內可經過氨基酸的路徑合成，烙點145℃。利用化學方法把小檗堿還原成為四氨小檗堿，會因失去原有共軛狀態下的季銨鹽結構，變為無色。當采用不同堿處理時，小檗堿以季銨型、醛型和醇型三種不同的形式存在，季銨型最為穩定。

2.黃連堿

黃連堿主要存在于罌粟科植物白屈菜的根，延胡索的塊莖，麗春花的全草及果實，節裂角茵香的干全草，棣棠草的根，荷包牡丹的全株，深山紫堇的全草，刻葉紫堇的全草，毛莨科植物日本黃連根，以及雅連的根莖，五葉黃連的根莖，云南黃連的根莖中。它是一種常見的的異喹啉生物堿，在乙醇溶液中以淺黃色地針狀結晶形式存在，在218℃會熔化，易溶于堿。它的含氯化合物為澄色棱柱形晶體，300℃也不溶解；含碘化合物是黃色地針狀晶體，超過280℃的條件下會分解；硫酸鹽為黃色的晶體，在水和乙醇中不溶。

3.巴馬丁

黃連大多生長于陰涼、潮濕的環境下，由于其長的像雞的爪子的形狀，所有又叫它雅連、川連、雞爪等，在國際上用途廣泛，屬于名貴的中藥材。而巴馬丁則是黃連的基本成分之一，主要存在于黃連的根莖部位，還存在于黃藤植物中。它又被稱為黃藤素。其含氯化合物為黃色針狀晶體，在198-201℃時能夠熔化，易溶于熱水，在常用有機溶劑中如乙醇等，溶解效果不是很好。經氫化生成延胡索乙素。

4.藥根堿

藥根堿是屬于四氫異喹啉生物堿，其組成和黃連素雷同，可以從防己科青牛膽和毛莨科黃連中經提取精制而獲得。目前，有很多研究醫藥方面的學者對其藥理性質等進行了深入探索。其含碘化合物為紅黃色的針狀晶體，208~210℃時能夠熔化，在水和乙醇中可以被溶解。其含氯化合物在甲醇－氯仿中時，為橙色的針狀結晶體，198~200℃時可發生分解。硝酸鹽在乙醇中，以黃棕色的針狀晶體形式存在，228~229℃時可發生分解。

三、含黃連制劑中生物堿類化合物的HPLC測定實例

（一）HPLC測定復方黃連素片中鹽酸小檗堿含量

復方黃連素片是由鹽酸小檗堿、木香、吳茱萸、白芍等幾味中藥組成的復方制劑，是一種臨床常用藥，用于治療濕熱痞滿，嘔吐瀉痢，高熱口渴，疔毒癰腫，目赤牙痛，心火力盛，心煩不寐，血熱吐衄等。鹽酸小檗堿為毛茛科植物黃連根莖中所含的一種主要生物堿，可由黃連、黃柏或三棵針中提取，也可人工合成。《中華人民共和國藥典》和藥品標準中均有鹽酸小檗堿的HPLC含量測定方法，但是標準方法的色譜條件下，鹽酸小檗堿的峰型存在拖尾現象。很多學者對鹽酸小檗堿含量測定方法進行了深入的研究，取得了很好的效果。

汪寒林對鹽酸小檗堿的HPLC測定方法進行了研究，以更好的用于復方黃連素片的質量控制。為解決拖尾現象，汪實驗研究方法所用的流動相為乙腈－0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(45∶55，含5%的0.05mol/L庚烷磺酸鈉溶液)，因為鹽酸小檗堿屬堿性較強的季銨型類生物堿，調節流動相水相和有機相的比例，并在流動相中加入緩沖溶液，加入離子對試劑增大離子強度有利于解決峰型拖尾問題。經過反復的試驗，最終得出本研究中的流動相組成，配合色譜柱、流速、柱溫等條件下，鹽酸小檗堿峰有較好的峰型，理論塔板數及分離度均為滿意。本研究所采用的樣品前處理方法為超聲提取法，該方法操作簡便，研究發現超聲時間為30min即能基本提取完全。

（二）HPLC測定黃連上清片中3種生物堿的含量