地龍活性蛋白的分離提取

地龍活性蛋白的分離提取

摘    要

地龍(Geosaurus)，又名蚯蚓，屬環(huán)節(jié)動(dòng)物門寡毛綱類，在我國(guó)是一種非常傳統(tǒng)的動(dòng)物類中藥材。10年版的《中華藥典》中，記載著它的功效為清熱定驚，通絡(luò)，平喘，利尿。地龍?bào)w內(nèi)富含蛋白質(zhì)，含有膠原酶、纖溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多種成分，具有改善微循環(huán)、溶解血栓等作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是探索并優(yōu)化一種地龍?bào)w內(nèi)活性蛋白的分離與提取方法，并使工藝更適合大批量的、藥用的生產(chǎn)。

傳統(tǒng)的地龍蛋白提取方法主要有勻漿法，浸泡煎煮法等。這些提取工藝、提取條件等都還不成熟，主要缺點(diǎn)包括提取時(shí)間長(zhǎng)，提取效率低，獲得的蛋白質(zhì)純度低并且不適于大量的工業(yè)生產(chǎn)。因而本實(shí)驗(yàn)在提取工藝流程中綜合性的應(yīng)用了閃提、超聲與離心等工藝手段，縮短了提取時(shí)間并提高了提取效率，再與一些純化處理過(guò)程互相配合，提取出含有多種地龍活性蛋白的蚓多酶。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響蛋白質(zhì)收率的一些因素，包括固液比，pH值和閃提時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化。

本實(shí)驗(yàn)得到的最佳工藝條件是：固液比1:4，pH值7.7，閃提時(shí)間30s；得到的蛋白質(zhì)含量為13.52%。

關(guān)鍵詞：地龍，活性蛋白，提取工藝，正交試驗(yàn)，蚓激酶

Abstract

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目錄

1緒論1

1.1課題背景及目的1

1.1.1地龍1

1.1.2地龍活性蛋白2

1.1.3地龍活性蛋白的分離提取方法3

1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀4

1.3 研究?jī)?nèi)容及方法5

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法6

2.1 實(shí)驗(yàn)材料6

2.1.1 原材料6

2.1.2 試劑6

2.1.3 儀器設(shè)備6

2.2 實(shí)驗(yàn)方法7

2.2.1 原材料含水量的測(cè)定7

2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法一 ——冷凍干燥法7

2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法二 ——硫酸銨沉淀法9

2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法三 ——乙醇乙醚雙脫水法13

2.3地龍?zhí)崛∥镏械鞍踪|(zhì)含量的測(cè)定16

2.3.1檢測(cè)原理16

2.3.2考馬斯亮藍(lán)法16

2.3.3地龍?zhí)崛∥镏械鞍踪|(zhì)含量的測(cè)定17

2.4 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)17

2.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)20

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論24

3.1三種工藝的提取結(jié)果24

3.2單因素試驗(yàn)結(jié)果25

3.3正交試驗(yàn)結(jié)果28

結(jié)論30

致謝32

參考文獻(xiàn)34