尿酸酶制劑在雞體內(nèi)的應(yīng)用研究

食品科學(xué)論文編號:SP012  論文字?jǐn)?shù):32453,頁數(shù):58

目錄
第一部分 前言 2
1尿酸酶的研究簡史[3，4] 3
2核酸疫苗 4
2.1質(zhì)粒載體的生物學(xué)特征 5
2.2 pET28a和pcDNA3.1-Uc的結(jié)構(gòu)特征 5
3酶類制劑 7
3.1酶純化方法[10] 8
3.2酶含量的測定 9
3.3尿酸酶活性的測定方法[12] 9
3.3.1終止反應(yīng)法（Stopped Method） 9
3.3.2連續(xù)反應(yīng)法（Continuous Method） 10
4高尿酸血癥動物模型的研究[14] 10
4.1建立高尿酸酶血癥動物模型的基本原理 11
4.2動物的選擇 12
4.3 雞痛風(fēng)病模型的研制 13
5 實驗?zāi)康暮鸵饬x 15
第二部分 尿酸酶的核酸（pcDNA3.1-UC質(zhì)粒）制劑在雞體內(nèi)的表達(dá)研究 15
1材料與方法 15
1.1 材料 15
1.1.1 菌種和質(zhì)粒 15
1.1.2試劑和溶液配置 15
1.1.3 儀器 19
1.2實驗方法 20
1.2.1菌體的活化 20
1.2.2質(zhì)粒pcDNA3.1-UC大量制備 20
1.2.3質(zhì)粒pcDNA3.1-UC的瓊脂糖凝膠電泳 21
1.2.4經(jīng)RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC質(zhì)粒的瓊脂糖凝膠電泳 21
1.2.5離子交換層析純化pcDNA3.1-UC質(zhì)粒 21
1.2.6 PCR鑒定純化質(zhì)粒為pcDNA3.1-UC 23
1.2.7 pcDNA3.1-UC質(zhì)粒在雞體內(nèi)的表達(dá)的檢測 24
2結(jié)果與分析 27
2.1 電泳檢測提取的pcDNA3.1-UC質(zhì)粒 27
2.2經(jīng)RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC質(zhì)粒的瓊脂糖凝膠電泳檢測 27
2.3 DEAE離子交換層析曲線 28
2.4 純化質(zhì)粒為pcDNA3.1-UC PCR鑒定 29
2.5 pcDNA3.1-UC質(zhì)粒在雞體內(nèi)的表達(dá)分析 29
2.5.1質(zhì)粒DNA溶液濃度的測定實驗結(jié)果 29
2.5.2 雞血清尿酸含量測定試驗結(jié)果: 30
3討論 34
第三部分 尿酸酶制劑在雞體內(nèi)的應(yīng)用研究 34
1材料與方法 34
1.1材料 34
1.1.1菌種 34
1.1.2 試劑及其配置 34
1.1.3 儀器 37
1.2 實驗方法 38
1.2.1 酶活性的檢測 38
1.2.2菌體的培養(yǎng)及誘導(dǎo)表達(dá) 39
1.2.3表達(dá)產(chǎn)物的提取 39
1.2.4硫酸銨分段鹽析 40
1.2.5 酶蛋白濃縮 40
1.2.6分子篩層析分離BL21/ pET28a-UC表達(dá)產(chǎn)物 40
1.2.7 雞血清尿酸含量測定 43
1.2.8 ELISA實驗檢測雞尿酸酶抗體 44
2 結(jié)果與分析 46
2.1分子篩（sephadex-200）純化BL21/ pET28a-UC表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)果 46
2.2尿酸酶溶液中酶活性測定的實驗結(jié)果 46
2.3 酶蛋白的DEAE離子交換曲線及結(jié)果 47
2.4尿酸酶溶液的濃度測定實驗結(jié)果 48
2.5已純化的尿酸酶SDS PAGE結(jié)果 48
2.6 雞尿酸含量測定試驗結(jié)果 49
2.7 ELISA實驗結(jié)果 52
3討論 53
第四部分 創(chuàng)新點與總結(jié) 53
參考文獻(xiàn) 54
致謝 58