喜樹發(fā)根培養(yǎng)及培養(yǎng)基中次生代謝產(chǎn)物的研究

食品科學(xué)論文編號(hào):SP033 本論文字?jǐn)?shù):14476,頁數(shù):29

目        錄
1  緒論 1
1.1  前言 1
1.2  喜樹生物學(xué)特性與藥用價(jià)值 2
1.2.1  生物學(xué)特征 2
1.2.2  藥用價(jià)值 2
1.3  擴(kuò)大喜樹堿藥源途徑的研究 3
1.3.1  組織培養(yǎng)及喜樹細(xì)胞懸浮培養(yǎng) 3
1.3.2  利用毛狀根培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)喜樹堿 4
1.3.2.1  發(fā)根農(nóng)桿菌的特性 4
1.3.2.2  毛狀根的轉(zhuǎn)化方法、培養(yǎng)和鑒定 5
1.4  光照對(duì)喜樹培養(yǎng)的影響 5
1.4.1  光照對(duì)毛狀根生長(zhǎng)及其次生代謝產(chǎn)物合成因素的影響 5
1.4.2  光照對(duì)喜樹愈合組織生理及喜樹堿合成的影響 6
1.4.3  光強(qiáng)對(duì)喜樹幼苗葉片次生代謝產(chǎn)物喜樹堿的影響 6
1.5  大孔吸附樹脂吸附原理 6
1.6  喜樹堿的富集與檢測(cè) 7
1.7  本課題研究的內(nèi)容 7
2.  喜樹發(fā)根培養(yǎng) 7
2.1  喜樹枝條不同組織及基本培養(yǎng)基的篩選 7
2.2  不同種類、濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)喜樹莖段腋芽、不定根的誘導(dǎo) 9
2.3  發(fā)根農(nóng)桿菌感染喜樹莖的培養(yǎng) 10
3  喜樹發(fā)根培養(yǎng)基中次生代謝產(chǎn)物喜樹堿提取 11
3.1  試驗(yàn)材料與儀器 11
3.1.1  試驗(yàn)材料 11
3.1.2  試驗(yàn)儀器 11
3.1.3  色譜條件 11
3.2  試驗(yàn)方法 11
3.2.1  標(biāo)液的配置 11
3.2.2  喜樹培養(yǎng)基中喜樹堿等有效成分富集試驗(yàn) 12
4  HPLC法檢測(cè)喜樹堿等喜樹有效成分 12
4.1  標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定 12
4.2  空白養(yǎng)基中喜樹堿的抽濾氯仿萃取與樹脂吸附的對(duì)比 15
4.3  培養(yǎng)基中富集喜樹堿等有效成分的HPLC檢測(cè)結(jié)果 15
4.3.1  培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)物喜樹堿等有效成分的檢測(cè) 15
4.3.2  喜樹培養(yǎng)基經(jīng)抽濾處理后濾渣與濾液中喜樹堿含量的對(duì)比 16
4.3.3  喜樹培養(yǎng)基中喜樹堿等有效成分的檢測(cè)結(jié)果 17
5  總結(jié)與討論 20
5.1  結(jié)論 20
5.2  存在問題與展望 20
5.2.1  存在的問題 20
5.2.2  展望 21
參  考  文  獻(xiàn) 22
英  文  摘  要 24
致     謝 25

摘    要
 喜樹毛狀根培養(yǎng)不僅能生產(chǎn)喜樹堿，而且可把二次代謝物如喜樹堿等分泌至培養(yǎng)基中，利用現(xiàn)代生物技術(shù)與現(xiàn)代分離技術(shù)綜合開發(fā)喜樹和喜樹堿，這是喜樹資源的保護(hù)開發(fā)的新突破。本論文先對(duì)喜樹發(fā)根進(jìn)行培養(yǎng)，然后使用氯仿提取喜樹培養(yǎng)基中喜樹堿等有效成分，并用HPLC檢測(cè)法檢測(cè)其有效成分，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)喜樹分泌在培養(yǎng)基中的次生代謝產(chǎn)物除了喜樹堿、羥基喜樹堿、白樺脂酸外，還含有其他有效成分。另外的氯仿提取法與樹脂吸附法對(duì)加了標(biāo)液的空白培養(yǎng)基進(jìn)行提取的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，證明了樹脂富集培養(yǎng)基中微量的喜樹堿的效果比氯仿提取的效果好，而且富集到的種類要比氯仿提取的多。這個(gè)實(shí)驗(yàn)為以后用樹脂作為吸附材料，從喜樹發(fā)根體系的培養(yǎng)基中富集喜樹堿做了很好的鋪墊。
關(guān)鍵詞：喜樹堿  喜樹發(fā)根培養(yǎng)基  氯仿提取  HPLC檢測(cè)

Research on Cultivating of the Camptotheca Acuminata Hairy Roots and the Secondary Metabolite Camptothecme in the Culture Medium
Abstract: The camptotheca acuminata hairy root raise not can only produce the camptotheca acuminata alkali, moreover may secretion and so on two metabolite like camptotheca acuminata alkali to the culture medium, the use modern biological technology and the modern isolation technique comprehensive development camptotheca acuminata and the camptotheca acuminata alkali, this is the camptotheca acuminata resources protection development new breakthrough. The present paper carries on the raise first to the camptotheca acuminata roots of the hair, then in the use chloroform extraction camptotheca acuminata culture medium the camptotheca acuminata alkali and so on effective component, and examines the law with HPLC to examine its effective component, the examination discovers the camptotheca acuminata secretion in the culture medium secondary metabolite besides the camptotheca acuminata alkali, the hydroxyl camptotheca acuminata alkali, the white birch fatty acid, but also includes other effective components. Other chloroform extraction process and the resin adsorption law to added the sign fluid blank culture medium to carry on the extraction the opposite experiment, had proven the resin concentrated in the culture medium the micro camptotheca acuminata alkali effect to be better than the chloroform extraction effect, moreover concentrated the type must compared to chloroform extraction many. This experiment will take the adsorption material for later with the resin, concentrated the camptotheca acuminata alkali from the camptotheca acuminata roots of the hair system's culture medium to make the very good upholstery.

Key word: camptotheca acuminata alkali    Camptotheca acuminata roots of the hair culture medium    Chloroform extraction    HPLC examination