梔子及其制劑中梔子苷含量測定方法研究進展(二)

梔子中含有大量的梔子苷，具有清熱降火等作用。從梔子中分離提取梔子苷的方法有很多，常用的提取方法有溶劑提取法、超聲波提取技術和超臨界流體萃取技術等。

（一）溶劑提取法

選用適合的溶劑將中藥材和中成藥中的待測成分溶出的方法稱溶劑提取法。所謂適合的溶劑就是對待成分溶解度大，對不需要的成分溶解度小或不溶的溶劑。中藥中的化學成分在溶劑的溶解度與溶劑性質有關，一般遵循“相似相溶”的原則，通過對待測主成分的結構分析來選用合適的溶劑。如苷類比其苷元的親水性強，苷往往由于分子中結合多個糖分子，羥基數目多，故有較強的親水性，可選用極性較強的溶劑提取，而苷元則為親脂性強的化合物，較多用極性小的溶劑提取。一般選用溶劑時，要求溶劑對待測成分溶解度大，而雜質溶解度小，所選擇溶劑不能與中藥中待測成分起化學變化，溶劑要求易得，使用安全。

1.乙醇提取法

由于乙醇的性質能溶解很多成分，因此我們采用乙醇浸潤法，對化學物質進行分離操作。由于乙醇是常見易得的化學溶劑，在化工醫藥行業的提純和制備中廣泛應用。同樣，梔子中的梔子苷也可以用乙醇來提取。

2.乙醚提取法

一般乙醚提取是利用溶劑回流和虹吸原理，加入乙醚反復進行回流，最后多次提取，將回流后的殘留物溶于乙醇中，經過過濾器過濾，將不溶物除去，減壓干燥就可以得到梔子苷。

3.水提取法

水是一種常見、容易獲取、對細胞穿透力強的強極性溶劑。水提取法追溯的年代比較久遠，但至今仍為提出的常用方法。主要做法是將要提取的物質和水按一定比例混合，然后煮沸得到液體，最后采用一定方法進行提取。由于梔子苷本身的特性，在水溶劑中很好地分離出來，因此我們也可以采用水提取法對梔子中的梔子苷進行提取。

（二）超聲波提取技術

超聲波是一種機械波，其具有頻率高、波長短、功率大、穿透能力強的特點。超聲波技術是將超聲波產生的空化、振動、粉碎、攪拌等綜合效應應用到天然產物成分提取工藝中，通過破壞細胞壁，增加溶劑穿透力，從而提高提取率和縮短提取時間，達到高效、快速提取化學物質的技術，一般用于中草藥的提取，對于梔子中的梔子苷同樣適用。

（三）超臨界流體萃取技術

超臨界流體一般是稍微超過物質本身的臨界溫度和臨界壓力狀態的流體，即在臨界點附近。超臨界萃取以超臨界流體為萃取劑，在臨界溫度和壓力附近的條件狀態下，從液體或者固體物質中萃取出帶分離的組份，一般用于食品，藥物和化工行業中。

三、含量測定方法簡介

（一）紫外分光光度法

分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法，常見的波長范圍為紫外光譜區（UV）、可見光譜區（VIS）和紅外光譜區（IR），研究物質在紫外光譜區吸收光譜的分析方法稱為紫外分光光度法。

相關其他光譜分析法來說，紫外分光光度法具有簡單、快速，靈敏度高，選擇性好，精密度和準確度較高，在儀器設備和其他測量條件較好的情況下，其相對誤差可低至1%-2%，同時由于紫外分光光度法不需要顯色劑，不受顯色劑、溫度及顯色時間等因素的影響。由于上述種種優點，使得紫外分光光度法在中藥分析中應用廣泛，近年來由于物理化學、電子學、計算機科學等的發展，使得紫外分光光度法的理論和應用得到了進一步的拓展。

（二）高效液相色譜法

高效液相色譜法起源于經典液相色譜法，是現代分析化學中最重要的分離分析方法之一。經典液相色譜法由于使用粗顆粒填料作為固定相，并靠重力使流動相流動，因而柱效低，分離周期長，而高效液相色譜相比經典液相色譜，具有高效、高速、高靈敏度、高自動化等特點。高效液相色譜法具有應用范圍廣的優點，主要表現在，HPLC不受試樣揮發和相對分子質量的限制，可用于分離高沸點、相對分子量較大、熱穩定性差的有機化合物，還可用于各種離子的分離；不僅可利用被分離組分的極性差別，還可利用組分分子尺寸大小的差別、離子交換能力的差別以及生物分子間親和力的差別進行分離；HPLC易于收集流出物組分，可利用制備柱進行較大量的制備。以上優點使得HPLC在色譜法中占有日益重要的地位，并且成為中藥分析中不可缺少的一種分離分析方法。

四、含梔子制劑中梔子苷的含量測定實例

（一）小兒豉翹清熱顆粒中梔子苷含量的測定

小兒豉翹清熱顆粒為棕褐色顆粒，味甘、微苦，具有疏風解表、清熱導滯的作用，主要用于小兒風熱感冒夾滯證。它的主要成分為梔子、連翹、淡豆豉等。李偉等采用紫外分光光度法測定了小兒豉翹清熱顆粒中梔子苷的含量，該測定用到的試劑和藥品有小兒豉翹清熱顆粒、梔子苷對照品、甲醇、異丙醇和檸檬酸等，用到的儀器有紫外分光光度計、超聲波清洗器和電子天平等。然后制備對照品溶液和供試品溶液，確定了最大吸收波長為228nm，分別取一定梯度的測試溶液和對照品溶液進行測定，梔子苷在0.52-2.60ml-1范圍內供試品溶液、陰性溶液、梔子苷的吸收度與溶液濃度之間均具有良好的線性關系。結果表明紫外分光光度法操作簡單，結果準確可靠，重現性好，可以用來測定小兒豉翹清熱顆粒中梔子苷的含量。

（二）高效液相色譜法測定解熱消炎膠囊中梔子苷含量

解熱消炎膠囊系由膽酸、黃芩苷、梔子提取物等組成的復方制劑，具清熱解毒，鎮驚安神之功效，主要用于外感風熱引起的發燒，咽喉腫痛，扁桃腺炎，咽炎等癥。黃聰燕等采用高效液相色譜法測定解熱消炎膠囊中梔子苷的含量，該測定用到的試劑和藥品有解熱消炎膠囊、梔子苷對照品、乙腈和純化水，用到的儀器有高效液相色譜儀、色譜工作站和電子天平。然后對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，確定了色譜條件，選用Aichrom C18(250 mm×4.6mm,5μm)色譜柱，乙腈-水(15：85)為流動相，檢測波長238 nm，流速1 ml/min。進行了色譜儀穩定性試驗，最后進行了含量測定，此方法簡便、準確、重現性好，可用于測定解熱消炎膠囊中梔子苷含量。

（三）小兒退熱合劑中梔子苷含量測定

小兒退熱合劑由連翹、金銀花、板藍根、黃芩、梔子等中藥組成，具有疏風解表，解毒利咽的功效。聶聰珍等采用高效液相色譜法測定小兒退熱合劑中的梔子苷的含量，該測定用到的試劑和藥品有小兒退熱合劑、梔子苷對照品、甲醇和純化水，用到的儀器有高效液相色譜儀、色譜工作站和電子天平。然后對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，確定了色譜柱：AgilentZORBAX SB -C18色譜柱 (4.6mm×250mm，5μm )；檢測波長：238nm；流動相：甲醇-水 (20：80)；流速：1m L/min；柱溫25℃，接著進行了線性關系考察，最后進行了含量測定。該方法準確、簡單、重復性好，可用于測定小兒退熱合劑中梔子苷的含量。

五、梔子及其制劑中梔子苷的含量測定方法總結

目前梔子的含量測定方法主要有紫外分光光度法和高效液相色譜法。紫外分光光度法，由于不受顯色劑、溫度及顯色時間等因素的影響，且檢測快速、準確，可適用于梔子及其制劑中梔子苷的含量測定，測定過程中一般采用228nm為測定波長，從供試品溶液吸收值和陰性溶液吸收值之差求得供試品溶液中梔子苷的吸收值，從而測定梔子苷的含量，紫外分光光度法方法簡單，結果準確可靠，重現性好，可用于質量控制。

高效液相色譜法，由于梔子苷為環烯醚萜苷類化合物，測定過程中一般采用采用C18色譜柱，流動相以乙腈和甲醇為主，檢測波長為238nm，流速1ml/min，測定梔子苷的含量，高效液相色譜法操作簡便、準確、重現性好。近年來，隨著高效液相儀器的進一步普及，運用高效液相色譜法測定制劑中梔子苷的含量居多。

參考文獻

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