葛根芩連片的含量測定研究進展 (2)(二)

由李麗莉,呂軼峰,朱雪妍的發表的《葛根芩連片多成分含量測定的研究》，該文章通過建立葛根芩連片中 14 個特征性成分的HPLC含量測定方法，并測定 11 家生產企業的葛根芩連片含量。

得出結論對11個廠家16 批樣品的測定，發現各批次中葛根、黃連、黃芩和甘草中所含指標性成分均有檢出，提示各企業均按規定投入相應藥味。但各指標性成分均存在一定差異，進一步說明了開展中成藥整體控制，多種成分同時測定比用單一指標成分控制中成藥質量更可靠。

由于黃芩苷和漢黃芩苷的水解產物為黃芩素、 漢黃芩素，故應以4個成分的總量來控制黃芩的質量。從各廠家的數據發現，黃芩中所含的成分各廠家差異顯著，以黃芩中的主要成分黃芩苷為例：含量最高的為26.56 mg·g-1（F廠，批號 130928），含量最低的僅為0.80 mg·g-1（G 廠）相差 30 倍，黃芩的其他 成分黃芩素、漢黃芩素和漢黃芩苷各樣品之間差異也 十分顯著。究其原因，除制劑過程中工藝控制的差異導致各企業產品差異外，也有可能為投料的差異所 致。傳統認為河南承德是黃芩的道地產地，現今內蒙、山西、吉林、云南、四川等均有黃芩出產。據文獻報道，不同產地的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等 有效成分差異顯著，野生黃芩與栽培黃芩有效成分也各有高低，為了更好地控制藥品的質量，保證藥品的安全有效，建議加強對葛根芩連片中黃芩的含量控制。

㈡HPLC 法同時測定葛根芩連片中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量

由袁藝,賈玉梅,包麗昕發表的《 HPLC法同時測定葛根芩連片中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量》，該文以黃連中的有效成分鹽酸小檗堿和黃芩中的有效成分黃芩苷為指標性成分，采用高效液相色譜法同時測定了鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量，該法靈敏、準確、重現性好，可有效控制葛根芩連片的質量。

從實驗中可知鹽酸小檗堿和黃芩苷分別在264nm和274nm有最大吸收，本實驗選用264nm作為吸收波長，使兩組分峰面積相近。在篩選流動相時，曾參考文獻選用乙睛與磷酸二氫鉀溶液混合，結果發現用甲醇與磷酸二氫鉀溶液以 45：65 混合時，峰形、分離度、出峰時間與用乙睛效果相近，故選用價格較低的甲醇。2005版藥典收載的葛根芩連片質量標準中未規定含量測定方法，本文采用高效液相色譜法，用一種流動相同時測定了兩種成分，提供了一種快速、準確、可靠的方法來控制本品的質量。

㈢RP -HPLC 法測定葛根芩連片中葛根素的含量

    由陳紅軍發表的《RP-HPLC法測定葛根芩連片中葛根素的含量》，文章建立以RP -HPLC 法測定葛根芩連片中葛根素含量的方法 。該方法簡便 、快速 、準確 , 可用于該制劑的質量控制。以葛根芩連片 (湖南生物藥品有限責任公司 , 批號 :031201 、 040601 、041020)作為實驗，從 3 批樣品中各取 3 份 , 每份約 0.23g , 精密稱定 ,按上述方法制備供試品溶液 。分別精密吸取對照品溶液 (78.32μg ·m L-1 )和供試品溶液各 5μL 注 入液相色譜儀 , 測定峰面積并計算含量。

該實驗在選擇色譜條件時，發現葛根素對照品溶液和供試品溶液的最大吸收峰均在 250nm 波長處 , 故選擇該波長為檢測波長。葛根素在選定色譜條件下，色譜峰對稱且尖銳 ,保留時間為15.8min 左右，陰性對照在葛根素保留時間處基本無干擾，供試品中葛根素與相鄰色譜峰達到完全分離。

該文章采用超聲提取方法 , 供試品超聲提取時間分別比較了10、20 、 30min , 結果20min 提取的葛根素含量比10min的要高 , 20min 與 30min 提取的含量基本相同，故確定超聲提取時間為20min。試驗結果表明 ,超聲提取 20min ,樣品中的葛根素已基本提取完全，且分離效果較好。

㈣高效液相色譜法測定葛根芩連中黃芩苷的含量

   由王小龍發表的《高效液相色譜法測定葛根芩連片中黃芩苷的含量》，該試驗通過采用H P L C 法測定了葛根芩連中主要黃酮類成分黃芩苷的含量，以黃芩苷片（產地河南，3個批號)為實驗，分別按樣品溶液的制備方法處理，分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液各20μL在上述色譜條件下測定黃芩苷含量，結果如下表：

從而看出高效液相色譜法測定葛根芩連片中黃芩苷的含量, 方法簡便,準確,重現性好，可作為質量檢驗的一個定量方法。

總結

通過高效液相色譜法，將葛根芩連片進行多成分含量測定，從數據發現，黃芩中所含的成分各廠家差異顯著，不同產地的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等有效成分差異顯著，野生黃芩與栽培黃芩有效成分也各有高低，為了更好地控制藥品的質量，保證藥品的安全有效，建議加強對葛根芩連片中黃芩的含量控制。同時測定主要藥味葛根和黃連指標性成分葛根素和鹽酸小檗堿的含量，可全面體現葛根芩連片組成成分，簡化了標準操作又節省了資源，為葛根芩連片的質量控制提供了參考。2015版藥典收載的葛根芩連片質量標準中未規定含量測定方法，用高效液相色譜法同時測定葛根芩連片中鹽酸小檗堿和黃芩中的有效成分，用一種流動相同時測定了兩種成分，提供了一種快速、準確、可靠的方法來控制本品的質量。

同時在特征圖譜的評價系統中提出了以雙標峰相對保留時間定位法進行特征峰定位，有效地解決了目前中藥復方成分復雜導致色譜系統波動引起色譜峰漂移所導致的特征峰定位困難的問題，為中藥特征圖譜評價系統提供新的思路。高效液相色譜法測定葛根芩連片中黃芩苷的含量, 方法簡便,準確,重現性好，可作為質量檢驗的一個定量方法。

參考文獻：

[1]李麗莉,呂軼峰,朱雪妍. 葛根芩連片多成分含量測定的研究[J]. 藥物分析雜志,2017,37(09):1607-1614.

 [2]袁藝,賈玉梅,包麗昕. HPLC法同時測定葛根芩連片中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J]. 中國傷殘醫學,2007(01):25-27.

 [3]陳紅軍.RP-HPLC法測定葛根芩連片中葛根素的含量[J]. 中國藥房,2007(18):1408-1409.

 [4]王小龍. 高效液相色譜法測定葛根芩連片中黃芩苷的含量[J]. 時珍國醫國藥,2004(04):197.

 [5]夏延任,楊新春. 葛根芩連片質量標準的研究[J]. 湖南中醫藥導報,2000(08):38-40.

 [6]朱雪妍,谷立勍,何頌華,馮旭. 葛根芩連片中摻入染色劑的檢測方法研究[J]. 藥物分析雜志,2016,36(04):711-720.

 [7]王海鳴,嚴志紅. 高效液相色譜法測定葛根芩連片中的葛根素[J]. 化學分析計量,2014,23(04):70-72.

 [8]吳永芹,徐魁. 石墨爐原子吸收分光光度法測定葛根芩連片中鉛、鎘、銅、錳的含量[J]. 中國藥師,2013,16(07):982-984.

 [9]盧蘭芳. 葛根芩連片的質量控制研究[J]. 中國實用醫藥,2011,6(09):13-14.

 [10]鄧開英,王曉琳,夏永鵬,邱宗蔭. 葛根芩連片中3種活性成分的HPLC法測定[J]. 中國醫藥工業雜志,2011,42(10):784-786.