不同力電刺激對MC3T3-E1細胞堿性磷酸酶基因表達的影響

不同力電刺激對MC3T3-E1細胞堿性磷酸酶表達的影響

學    生：薛  飛      

指導教師：李  萍      

摘    要

成骨細胞在體內受到多種因素的影響，如力學環境、電場、磁場以及生化因素等，骨組織的形成過程中前成骨細胞的骨向分化是重要的生理過程，而骨向分化過程伴隨著各種物理化學信號對細胞的刺激，其中牽張刺激和電刺激對前成骨細胞的增殖與分化分別具有一定的作用。同時加載牽張電刺激能夠更加真實地模擬體內細胞生長的微環境，有利于促進成骨細胞的體外培養以及骨組織的體外培育。

本實驗建立在這兩種不同刺激的效應之上，通過使用自行設計的牽張、電刺激加載裝置，比較分別加載牽張、電刺激以及同時加載兩種刺激對于前成骨細胞MC3T3-E1分化的影響。牽張力和電刺激以及力電同時刺激實驗均通過RT-PCR法檢測成骨細胞堿性磷酸酶（ALP）基因表達情況。

結果表明牽張力刺激會抑制成骨細胞的堿性磷酸酶（ALP）基因的表達，即抑制成骨細胞的分化；電刺激對成骨細胞的堿性磷酸酶基因的表達沒有顯著性作用。 

力電刺激方式為體外細胞培養、生物反應器的設計、骨疾病的治療及組織培育提供了新的思路，對組織工程的進一步發展具有重要的研究意義。

關鍵詞：成骨細胞，牽張力刺激，電刺激，ALP基因表達，分化

Abstract

...

目      錄

1緒論1

1.1研究背景1

1.1.1力刺激對成骨細胞的影響2

1.1.2電刺激對成骨細胞的影響3

1.1.3電刺激形式3

1.1.4電刺激對成骨細胞的生物學效應4

1.1.5電刺激促進成骨的作用機制5

1.1.6電刺激在骨組織工程中的應用6

1.2課題研究意義7

2實驗目的9

2.1研究內容9

3實驗材料10

3.1主要設備10

3.2主要試劑11

3.3主要試劑配制11

4實驗方法12

4.1細胞培養12

4.1.1細胞復蘇12

4.1.2細胞傳代12

4.2牽張力與電刺激加載12

4.2.1牽張刺激加載實驗12

4.2.2電刺激加載實驗13

4.2.3牽張電聯合刺激加載實驗13

4.3RT-PCR方法檢測堿性磷酸酶mRNA的表達13

4.3.1提取胞內總RNA13

4.3.2逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）14

4.3.3凝膠配置方法15

5數據處理16

5.1RT-PCR圖片處理16

6結果及分析18

6.1結果18

6.2討論19

6.2.1牽張力刺激實驗19

6.2.2脈沖電刺激實驗20

6.2.3與其他研究的區別20

結論22

致謝23

參考文獻24