白藜蘆醇對小鼠腎臟衰老的影響

白藜蘆醇對小鼠腎臟衰老的影響

摘    要

衰老是人類不可避免的復雜生理現象，而腎臟是伴隨著衰老而出現明顯形態和功能改變的重要器官之一。有研究發現，長期高脂飲食習慣會嚴重影響大鼠的認知能力，使機體出現提前衰老的癥狀[1]。白藜蘆醇是一種生物性很強的天然多酚類物質，它不僅是植物遭受脅迫時產生的一種能提高植物抵抗病原性攻擊和環境惡化的植物抗毒素, 還具有抗癌[2]、抗氧化[3]、調節血脂[4]、影響壽命[5]等多方面有益于人類健康的重要功能。沉默信息調節因子-2家族在很多種模式生物中已經成為一類對于衰老起著關鍵作用的調控因子，它們具有高度保守的酶催化核心結構區域。哺乳動物Sirtuins家族由7個成員組成， 其中SIRT1被多次認定為長壽基因[6]。近年來，越來越多的研究發現SIRT6作為哺乳動物中NAD+依賴的組蛋白去乙酰化酶，對機體壽命調控有重要作用[7]。研究發現：白藜蘆醇等植物中多酚類小分子主要是通過激活組蛋白去乙酰化酶的活性，進而調控下游基因轉錄及活性來實現的[8]。

本試驗中使用的實驗動物是經過高脂飲食、高脂飲食加白藜蘆醇、正常飲食、正常飲食加白藜蘆醇四種培養方式培養三個月后獲得的，提取腎臟組織后分別進行PAS、HE、Masson、β-gal染色。提取組織蛋白和RNA，通過western blot來檢測SIRT6的表達量以及NF-κB的乙酰化水平，通過Real-time PCR技術檢測SIRT6的RNA表達水平。研究結果：從四種染色結果分析發現白藜蘆醇對高脂飲食引起的腎臟早老具有改善作用，但對于正常飲食的小鼠腎臟無明顯作用；進行高脂飲食處理的小鼠腎臟SIRT6表達量最低，乙酰化的NF-κB表達量最高，經過白藜蘆醇作用后，SIRT6表達量升高，乙酰化的NF-κB表達量下降；對于正常飲食的小鼠是否加入白藜蘆醇對SIRT6和乙酰化的NF-κB表達量的影響不大。從而得出，白藜蘆醇確實可以改善由高脂飲食引起的腎臟衰老，而且可能是通過調節NF-κB的乙酰化水平來實現的，但對于正常飲食的小鼠，白藜蘆醇沒有明顯的改善作用。

關鍵詞：腎臟衰老，白藜蘆醇，高脂飲食，SIRT6，NF-κB

Abstract 

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目       錄

1  緒論1

1.1課題背景及目的1

1.2國內外研究狀況3

1.3論文構成及研究內容10

2  研究方案12

2.1研究目標12

2.2儀器設備、材料、試劑藥品的選擇12

2.3實驗內容13

3  實驗結果18

3.1PAS染色結果18

3.2HE染色結果19

3.3Masson染色結果21

3.4SA-β-gal 染色結果22

3.5Western-blot 結果24

3.6Real-time PCR 結果25

4  討論與展望26

4.1高脂飲食誘導腎臟衰老26

4.2白藜蘆醇對高脂飲食引起的腎臟衰老有緩解作用27

4.3SITR6在白藜蘆醇緩解衰老過程中發揮作用28

4.4展望28

結論31

致謝32

參考文獻33

附錄A  BCA 法測蛋白質濃度35

附錄B  western blot 操作方法36

附錄C  Real-time PCR 操作流程39