利用蛋白質組學技術鑒定大豆籽粒貯藏蛋白亞基 A1aB1b缺失體

食品科學論文編號:SP038  論文字數:7971,頁數:17  附任務書,開題報告,答辯PPT

目  錄

1 材料與方法 2
1.1 材料 2
1.2 主要試劑 3
1.3 主要儀器設備 3
1.4 方法 3
1.4.1 大豆種子貯藏蛋白的提取和SDS-PAGE按第二章所述方法進行 3
1.4.2 大豆種子蛋白2-DE樣品的制備 3
1.4.3 蛋白質濃度測定 4
1.4.4 大豆種子總蛋白的雙向電泳 4
1.4.4.1 第一向固相pH梯度等電聚焦電泳（IPG-IEF） 4
1.4.4.2 第二向SDS-PAGE 5
1.4.5考馬斯亮藍染色 5
1.4.6 2-DE圖像分析 5
1.4.7 取點 5
1.4.8 考染蛋白點的膠內酶解 5
1.4.9 差異蛋白質點的質譜分析 5
1.4.10 MALDI-TOF-MS肽質指紋分析 6
1.4.11 質譜數據的數據庫搜索 6
2 結果與分析 6
2.1 SDS-PAGE圖譜分析 6
2.2 2-DE圖譜分析 7
2.3 MALDI-TOF-MS分析 8
2.4 數據庫搜索比對結果 10
3 討論 11
3.1 大豆種子總蛋白的雙向電泳 11
3.2 蛋白質組學技術在大豆蛋白種子表達研究上的應用 12
3.3 大豆種子蛋白A1aB1b亞基缺失在功能特性上的意義 14
參考文獻 15

摘  要  在SDS-PAGE篩選到A1aB1b或A1bB2或A2B1a亞基缺失的基礎上，運用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳（2-DE）分析大豆貯藏亞基正常品種南農大黃豆和亞基缺失品種桂陽紫金豆種子總蛋白的蛋白質組。差異蛋白質組學顯示，等電點和分子量分別約為x1和y1、x2和y2、x3和y3的蛋白質點在正常品種種子中表達而在缺失品種中未表達。對這3個蛋白質點用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（Matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）測定其膠內酶解后的肽質量指紋譜（Peptide Mass Fingerprint，PMF），經Mascot：Peptide Mass Fingerprint中NCBI數據庫查詢后，鑒定這3個蛋白質均為Soybean Proglycinin A1ab1b Homotrimer，表明桂陽紫金豆種子貯藏蛋白缺少A1ab1b亞基。
     關鍵詞  蛋白質組學； 鑒定； 大豆貯藏蛋白； A1aB1b亞基； 缺失

Abstract:This thesis focuses on applying 2-DE to analyze the proteome of the seed protein of soybean varieties “Nannongdahuangdou” which contains normal subunits and “Guiyangzijindou” which lacks subunits on the basis of SDS-PAGE selection and the absence of the A1aB1b or A1bB2 or A2B1a –subunits. Three protein spots with pIx1 , Mr y1kDa; pIx2 , Mr y2kDa; pIx3, Mr y3 kDa respectively show normal expression in the seed protein of the variety “Nannongdahuangdou”, while no expression in the mutant line. After being tested the PMF with Matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS and surveyed by the NCBI state base of Mascot：Peptide Mass Fingerprint, these three proteins were all identified as Soybean Proglycinin A1ab1b Homotrimer. The results indicated that the variety “Guiyangzijindou” lacks A1ab1b-sununits.
Keywords: Proteomics； identification； soybean storage protein； A1ab1b-sununits； absence